Immunologisk forskning inden for urologi

Udnævnelse immunogram urologiske patienter betyder, at lægen tyder på tilstedeværelsen af forstyrrelser i immunsystemet. Duplikere bakterielle, virale, fungale infektioner, allergiske reaktioner, kan systemiske sygdomme være symptomer på disse sygdomme, som er karakteriseret ved en række syndromer (infektion, cancer, allergiske, autoimmune, lymfoproliferative). En patient kan have flere syndromer. For eksempel kan kroniske infektionssygdomme (smitsom syndrom) forårsage immundefekt og immundefekt kan manifestere disposition for infektionssygdomme og cancer (Cancer Syndrome). Modtagelighed for infektioner forekomme på baggrund af sekundær immundefekt, som udviklede grund lymfoproliferative sygdomme såsom leukæmi. Der er tre hovedgrupper af patologiske forandringer i immunsystemet:

• den kvantitative eller funktionelle mangel på et eller andet immunitetslink, som fører til udvikling af en immunbristetilstand
• en krænkelse af immunsystemets anerkendelse af antigenet, hvilket fører til udvikling af autoimmune processer;
• hyperreaktivt eller "perverteret" immunrespons, manifesteret af udviklingen af allergiske sygdomme.

Der er screening (test af niveau 1) og kvalificering (test af 2 niveauer) metoder til immunodiagnostik. Den førstnævnte eksisterer for at rette krænkelser i immunsystemet, sidstnævnte - at etablere mekanismerne involveret i deres gennemførelse med henblik på yderligere immunkorrektion.

B-Cellular link af immunitet

Screening metoder

• Bestemmelse af den relative og absolutte antal B-lymfocytter via immunofluorescens eller flowcytometri under anvendelse af monoklonale antistoffer til B-celle-antigener (CD19, CD20, hvori CD - cluster of differentiation). Indholdet af B-lymfocytter i normale voksne: 8-19% af totale leukocytter eller 190-380 celler / ml. Forøgelse af indholdet af B-lymfocytter forekommer i akutte og kroniske bakterielle og fungale infektioner, kronisk leversygdom, systemiske bindevævssygdomme, kronisk lymfatisk leukæmi, multipel myelom.
• Bestemmelse af koncentrationen af immunglobuliner nespespetsificheskih (F, M, G, E) ved en enkelt radial immundiffusion eller turbometrii nephelometri, radioimmunoassay eller enzymimmunoassay (EIA). Normer for voksne: Immunglobulin (Ig) En 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Forøgelse af koncentrationen af immunglobuliner forekommer ved de samme patologiske tilstande, for hvilke forøgelse af indholdet af B-lymfocytter forekommer. Reduktion af koncentrationen af immunglobuliner er i medfødt hypogammaglobulinæmi, tumorer i immunsystemet, fjernelse af milten, proteintab, ved sygdomme i nyrer eller tarme, behandling med cytostatika og immunodepreesantami.

Angivelse af metoder

• Bestemmelse af cirkulerende immunkomplekser i blodet ved selektiv udfældning i polysilenglycol efterfulgt af spektrofotometrisk tæthedsprøvning (normalt 80-20 UE). Forøgelse af cirkulerende immunkomplekser er karakteristisk for akutte bakterielle, svampe, virusinfektioner, autoimmune, immunokomplekse sygdomme, serumsygdom, allergiske reaktioner af type 3;
• Bestemmelse af specifikke immunoglobuliner i blodet i forhold til bakterielle og virale antigener, deoxyribonukleinsyre (DNA) ved autoimmune sygdomme, identifikation af sæd (autoimmun infertilitet) og protivopochechnyh antistoffer (pyelonephritis og glomerulonephritis) ved radial immundiffusion eller ELISA.
• Bestemmelse af antisperm-antistoffer i sædcellerne [MAR-test (blandet antiglobulinreaktion)], normen er negativ.
• Bestemmelse af koncentrationen af immunoglobuliner i urinen med henblik på differentialdiagnose mellem pyelonefrit og glomerulonefritis (selektivitet af proteinuri).
• Bestemmelse af IgE i prostatajuice til diagnose af allergisk prostatitis ved radial immunodiffusion eller ELISA. 
• Forskning i afhængighed blasttransformation reaktion af lymfocytter B på en B-celle-mitogen (kermesbær mitogen for stimulering af blasttransformation reaktion af B-lymfocyt i nærvær af T-lymfocytter), hvor standard værdi på 95-100%.

T-celle link af immunitet

Screening metoder

• Bestemmelse af den relative og absolutte antal modne CD3 T-lymfocyt reaktion ved immunofluorescens eller flowcytofluorometri under anvendelse af anti-SDZ monoklonale antistoffer. Normen for voksne er 58-76% eller 1100-1700 celler / μl. Reducere antallet af T-lymfocyt-indikator celleimmunitet. Dette er karakteristisk for flere sekundære og primære immundefekter (kroniske bakterielle og virale infektioner: tuberkulose, erhvervet immundefektsyndrom, kræft, kronisk nyresvigt, traume, stress, aldring, fejlernæring, behandling med cytotoksiske lægemidler, ioniserende stråling). Forøgelse af antallet af T-lymfocytter er på baggrund af immun hyperaktivitet eller lymfoproliferative sygdomme. Med betændelse øges antallet af T-lymfocytter først og falder derefter. Fravær af et fald i T-lymfocytter foreslår kronisk behandling af den inflammatoriske proces.
• Vurdering af subpopulationerne af lymfocytter.
  • Bestemmelse af antallet af T-hjælpere (anti-CD4-antistof). Normalt er 36-55% eller 400-1100 celler / μl. En stigning i antallet af disse celler forekommer i autoimmune sygdomme, Waldenstroms sygdom, aktivering af antigraftimplantation; reduktion i antallet af T-hjælper celler forekommer i kroniske bakterielle, virale, protozoinfektioner, tuberkulose, erhvervet immundefektsyndrom, malignitet, forbrændinger, trauma, fejlernæring, aldring, cytostatika behandling, ioniserende stråling.
  • Bestemmelse af antallet af T-suppressorer (anti-CD4-antistof). Normalt er 17-37% eller 300-700 celler / μl. En stigning i antallet af T-suppressorer sker med de samme betingelser, hvor antallet af T-hjælpere falder, og deres fald på de samme betingelser, når indholdet af T-hjælpere stiger.
  • Immunoregulatorisk indeks CD4 / CD8, i normen 1,5-2,5. Hyperaktivitet ved hastigheder på mere end 2,5 (allergiske og autoimmune sygdomme); hypoaktivitet - mindre end 1,0 (disponering for kroniske infektioner). Ved begyndelsen af den inflammatoriske proces stiger det immunoregulatoriske indeks, og når det falder, normaliseres det.

Angivelse af metoder

• Bestemmelse af antallet af naturlige mordere (NK-celler) - anti-CD16 og anti-CD56-antistoffer. Normen for CD 16-lymfocytter er 6-26%, CD56 - 9-19%. Forøgelse af antallet af NK-celler forekommer i transplantatafstødning, falde - i virusinfektioner, kræft, primære og sekundære immundefekter, forbrændinger, trauma og stress, behandling med cytostatika og ioniserende stråling. 
• Bestemmelse af antallet af T-lymfocytter med receptoren for interleukin-2 (aktiveringsmarkør) - anti-CD25-antistoffer. Normen er 10-15%. En stigning i deres antal blev observeret i allergiske sygdomme, transplantatafstødning, respons på thymusafhængige antigener under den akutte primær infektion, reduktion - under de samme sygdomme, som involverer reduktion af antallet af NK-celler.
• Undersøgelse af udtrykket af aktiveringsmarkøren - histokompatibilitetsmolekylet i klasse II HLA-DR. Øget ekspression forekommer i inflammatoriske processer, hos patienter med hepatitis C, cøliaki, syfilis, akut respiratoriske infektioner.
• Evaluering af apoptose af lymfocytter. En indikation af rede lymfocytapoptose kan identificeres ved deres ekspression af overflade Fas-receptoren (CD95) i mitochondrier og bd-2 protoonkogen. Apoptose blev vurderet ved lymfocyt behandling to fluorescerende farvestoffer: propidiumiodid, som binder til DNA-fragmenter og annexin Y, binding til phosphatidylserin på cellemembranens optræder i tidlig apoptose. Evaluering af resultaterne udføres på et flowcytofluorimeter. Beregningen af resultater er baseret på forholdet mellem celler farvet med forskellige farvestoffer. Ufarvede celler er levedygtige celler, der er forbundet kun med annexin Y - tidlige tegn på apoptose, med propidiumiodid og annexin I - sene manifestationer af apoptose, farvning kun propidiumjodid indikerer nekrose.
• Evaluering af proliferationen af T-lymfocytter in vitro.
  • Ændring i celleblastogenese er en reaktion af blast-transformationen af lymfocytter. Leukocytter inkuberes med ethvert mitogen af vegetabilsk oprindelse (lectiner). Mere almindeligt anvendt phytohemagglutinin i 72 timer, så smør det, plet det og tæl antallet af blaster! Stimuleringsindekset er forholdet mellem procentdelen af transformerede celler i eksperimentet (kultur med phytohemagglutinin) til procentdelen af transformerede celler i kontrollen (kultur uden phytohemagglutinin). Reaktionen af blast-transformationen af lymfocytter kan vurderes ved inddragelse af en radioaktiv mærkning (ZN-thymdin) i dyrkede celler, idet DNA-syntese øges, når cellerne deles. Forstyrrelser i det proliferative respons forekommer både i primære og sekundære immundefekter forbundet med infektioner, onkologiske sygdomme, nyreinsufficiens og kirurgiske indgreb.
  • Evaluering af disse undersøgelser, ekspressionen af aktiveringsmarkører (CD25, transferrinreceptor til - CD71) molekyler og MHC-klasse II HLA-DR, som i det væsentlige fraværende på hvilende T-lymfocytter. T-lymfocytter stimuleret med phytohemagglutinin efter 3 dage udtrykket aktiveringsmarkører blev analyseret ved direkte eller indirekte immunofluorescens, flowcytometri under anvendelse af monoklonale antistoffer udskilt receptorer.
  • Måling af mængden af mediatorer syntetiseres af aktiverede T-lymfocytter [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, etc.], ved hjælp af radioimmunoassay eller ELISA. Især vigtigt er koncentrationen estimat y-interferon og IL-4 begge mærker YOU Th2 og i supernatanten af kulturer og aktiveret intracellulært. Hvis det er muligt, er det nyttigt at bestemme ekspressionen af genet for den relevante cytokin af niveauet af messenger-ribonukleinsyre i threoninproducerende celle- og receptorekspressions- intensiteter for de respektive cytokiner.
    
• Reaktionen af inhibering af migration af lymfocytter. Sensibiliserede T-lymfocytter i reaktionen med antigenfrigivelseslymfokinerne, herunder faktorer. Hæmmer migrering af lymfocytter. Fænomenet hæmning observeres, når mitogener indføres i cellernes kultur. Evaluering af graden af hæmning gør det muligt at bedømme lymfocytternes evne til at frigive cytokiner. Normalt er migrationsfrekvensen afhængig af det specifikke mitogen 20-80%.
• Evaluering af cytotoksicitet af NK-celler. Bestem de naturlige killerscellers evne til at dræbe målceller af erythromyeloidlinjen K-562. Hvis antistofafhængig cytotoksicitet evalueres, anvendes målceller overtrukket med IgG-antistoffer. Målceller mærkes med 3H-uridin og inkuberes med effektorceller. Målcellernes død estimeres fra frigivelsen af den radioaktive mærke til opløsningen. Reduktion af cytotoksicitet forekommer med maligne neoplasmer. I nogle tilfælde evalueres cytotoksiciteten af NK-celler, når der inkuberes med visse cytokiner, når en prognose af effektiviteten af behandling med interleukiner er påkrævet.

Undersøgelse af funktionen af fagocytter

Screening metoder

Undersøgelse af absorptionen af mikrobielle celler af fagocytter (fagocytose af latexpartikler, testkultur af stafylokokker, Escherichia coli eller mikroorganismer isoleret fra patienten). Ved centrifugering af det hepariniserede blod isoleres en suspension af leukocytter, serum af IV-blodgruppen tilsættes til opsonisering (opsoniner er proteiner, der forstærker fagocytose). Den mikrobielle suspension fortyndes, blandes med leukocytter og inkuberes i 120 minutter, prøveudtagning til analyse efter 30,90,120 min efter begyndelsen af inkubation. Af de udvalgte leukocyt suspensioner gør udtværinger. Bestem følgende indikatorer for fagocytose:

• fagocytisk indeks - procentdelen af celler, der indtog fagocytose i 30 minutter og 120 min inkubation; normativ værdi af fagocytisk indeks (30) 94% af fagocytisk indeks (120) - 92%;
• fagocytisk antal - det gennemsnitlige antal bakterier, der er intracellulære; den normative værdi af fagocytisk nummer (30) 11%, fagocytisk nummer (120) - 9,8%;  
• fagocytisk koefficient - forhold af fagocytisk nummer (30) til fagocytisk nummer (120); normal 1,16;
• Neutrofilernes baktericide indeks er forholdet mellem antallet af mikrober dræbt inde i fagocytterne til det samlede antal mikrober taget op; i normen på 66%.

Angivelse af metoder

• Undersøgelse af den baktericide aktivitet af fagocytter i testen med nitrosintetrazolium (NST) er NST-testen. Til leukocytterne tilsættes farvestof nitrogen tetrazoliumgult. Når farvestoffet absorberes af neutrofilen, foregår reduktionsprocessen under virkningen af fri radikaler af oxygen, hvilket resulterer i en blå farvning. Reaktionen udføres i en 96-brønds fladbundet plade. I de første tre brønde med en blanding af HCT og leukocytter tilsættes Hanks-opløsning (spontan HCT) i sidstnævnte latexpartikler; inkuberes ved 37 ° C i 25 minutter. Resultaterne læses ved 540 nm på læseren og udtrykkes i konventionelle enheder. Beregn stimuleringsfaktoren ( _Kst ), der er lig med forholdet mellem optisk densitet i de stimulerede brønde og den gennemsnitlige optiske densitet i brøndene uden stimulering. Hos raske mennesker, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _v = 1,78 ± 0,36.
• Undersøgelse af adhæsionsmolekyler. Ved hjælp af flowcytofluorimetri bestemmes ekspressionen af overfladeantigener CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18. Immunficiencies med krænkelse af adhæsion manifesteres ved tilbagefald af infektioner, langsom helbredelse af sår og fravær af pus i smittefokus.

Undersøgelse af komplementsystemet

Screening metoder

Bestemmelse af hæmolytisk aktivitet af komplement - en undersøgelse af den klassiske vej for komplementaktivering. Forskellige fortyndinger af patientens serum og en sund person tilsættes til erythrocytter af et får belagt med antistoffer. En enhed af hæmolytisk aktivitet tages som omvendt af fortyndingen af serum, hvor 50% af erythrocytterne destrueres. Graden af hæmolyse vurderes fotometrisk ved udbyttet af hæmoglobin i opløsningen. Reduktion af hæmolytisk aktivitet af komplement observeres i systemisk lupus erythematosus med nyreinddragelse, akut glomerulonefritis. Kombinerede immundefekter, myasthenia gravis, viral hepatitis, lymfomer, stigning - med obstruktiv gulsot, thyroiditis Hashimoto. Reumatisme, rheumatoid arthritis, nodulær periarteritis. Dermatomyositis, myokardieinfarkt, ulcerøs colitis, Reiter's syndrom, gigt.

Angivelse af metoder

• Bestemmelse af komplementkomponenter. Den kvantitative bestemmelse udføres ved metoden med radial immunodiffusion og nephelometri.
  Undersøgelsen er ikke informativ, medmindre de antigene egenskaber af komplementkomponenter ændres.
• Det blev fundet, at Clq-komponenten af komplementet forstærker fagocytose og medierer cellulær cytotoksicitet. Dens fald forekommer i sygdomme i immunkomplekser, systemisk lupus erythematosus, purulente infektioner og tumorer.
• C3-komponenten deltager i aktiveringen af den klassiske og alternative komplementvej. Reduktion af dets koncentration er forbundet med kroniske bakterielle og svampeinfektioner, tilstedeværelsen af cirkulerende eller vævsimmunkomplekser.
• C4-komponenten deltager i aktiveringen af den klassiske vej. Reduktion af dets koncentration er forbundet med en langvarig aktivering af komplement med immunkomplekser og et fald i koncentrationen af C1-inhibitoren, som styrer aktiveringen af den klassiske komplementvej. C4-mangel forekommer med systemisk lupus erythematosus, forekommer en stigning i C4 med nyresygdom, transplantatafvisning, akut inflammation og sygdomme i mave-tarmkanalen.
• C5a er et lille fragment af C5 molekylet, opdelt fra det som et resultat af aktivering af komplementsystemet. Forøgelse i koncentrationen forekommer med betændelse, sepsis, atopisk og allergisk sygdom.
• Cl-hæmmer er en multifunktionel faktor. Det styrer aktiveringen af C1-komponenten af komplement, hæmmer aktiviteten af kallikrein, plasmin og aktiveret faktor Hageman, proteaser Cls og Or. Mangel på C1-hæmmer fører til angioødem.
• supplerende undersøgelser. Til det normale serum, der mangler nogen komplementbestanddel, tilsættes testserumet, og komplementets hæmolytiske aktivitet bestemmes. Hvis den hæmolytiske aktivitet ikke genoprettes til normal, menes det, at aktiviteten af denne komplementkomponent i testserumet er reduceret.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]