Konfokal intravital mikroskopi af hornhinden

Konfonet mikroskopi af hornhinden er en af de moderne undersøgelsesmetoder; tillader at udføre intravital overvågning af hornhinde tilstanden med visualisering af væv på det cellulære og mikrostrukturelle niveau.

Denne metode gør det muligt at visualisere levende hornhindevæv, at måle tykkelsen af hvert af dets lag og at vurdere graden af morfologiske lidelser på grund af mikroskopets originale design og dets høje opløsning .

Formålet med hornhinde mikroskopi

Karakteriserer de morfologiske forandringer i hornhinden, der skyldes forskellige inflammatoriske og dystrofiske sygdomme, samt fra kirurgiske indgreb og virkningerne af CR.

Morfologiske data er nødvendige for at vurdere sværhedsgraden af den patologiske proces, effektiviteten af behandlingen og bestemme patientlederens taktik.

Indikationer for proceduren

• Inflammatoriske sygdomme i hornhinden ( keratitis ).
• Dystrofiske sygdomme i hornhinden ( keratokonus, Fuchs dystrofi, etc.).
• Syndrom af "tørt øje".
• Betingelser efter kirurgiske indgreb på hornhinden (gennem hornhindetransplantation, keratorfraktive operationer).
• Betingelser forbundet med brug af kontaktlinser.

[1], [2], [3], [4]

Forberedelse

Denne undersøgelse er mulig uden brug af anæstetika. En dråbe nedsænkningsvæske anbringes på objektivet i den konfokale mikroskoplinsen. Dette eliminerer linsens direkte kontakt med hornhinden og minimerer risikoen for epitelskader.

[5], [6], [7], [8], [9],

Teknik konfokal mikroskopi af hornhinden

Undersøgelsen udføres på et konfokalt mikroskop ConfoScan 4 (Nider) med en stigning på 500 gange. Enheden giver dig mulighed for at undersøge hornhinden over hele dens tykkelse.

Størrelsen af den undersøgte zone er 440 × 330 μm, tykkelsen af scanningslaget er 5 μm. Et objektiv med en dråbe gel bringes til hornhinden for at røre og sætte, så tykkelsen af det nedsænkende væskelag er 2 mm. Enhedsdesign giver dig mulighed for at undersøge hornhinden i den centrale zone og dens paracentrale områder.

Kontraindikationer til proceduren

Relativ kontraindikation markerede irritation af øjet mod baggrund af en akut inflammatorisk proces.

[10], [11]

Normal ydeevne

Normal morfologisk billede af hornhinden

Det forreste epitel består af 5-6 lag celler. Den gennemsnitlige tykkelse af hele epitelet er ca. 50 μm. Ifølge den morfologiske struktur skelnes følgende lag (fra indersiden udad): basal, subuleret og overfladisk.

• Det inderste (basale) lag er repræsenteret af små tætte cylindriske celler uden synlig kerne. Den basale celle grænser er klare, lyse.
• Mellemlaget består af 2-3 lag rygsøjleformede (winged) celler med dybe invaginationer, i hvilke udvækst af naboceller er bygget. Mikroskopisk er cellegrænser ret forskelligt, og kernerne må ikke defineres eller være fuzzy.
• Overfladelaget af epitelet er repræsenteret af et eller to lag polygonale celler med klare grænser og en homogen tæthed. Kernerne er sædvanligvis lysere end cytoplasmaet, hvor man også kan skelne mellem en nukleær mørk ring.

Blandt overfladelagens celler skelner mellem mørkt og lys. Den øgede reflektivitet af epithelceller indikerer et fald i niveauet af stofskifte i dem og begyndelsen af deres desquamation.

Bowman membranen er en gennemsigtig struktur, der ikke afspejler lys, så det er umuligt at visualisere det, når konfokal mikroskopi udføres.

Subbasisk nerve plexus er placeret under Bowman membranen. Normalt ser nervefibrene ud som lyse strimler, der løber parallelt på en mørk baggrund, og kontakter hinanden. Refleksivitet (refleksivitet) kan være ujævnt i fiberlængde.

Hornhinden stroma indtager 80 til 90% af hornhinde tykkelsen og består af en cellulær og ekstracellulær komponent. De grundlæggende cellulære elementer i stroma er keratocytter; udgør ca. 5% af volumenet.

Et typisk mikroskopisk mønster af stroma omfatter flere lyse uregelmæssige ovalformede legemer (keratocytkerner), der ligger i tykkelsen af en gennemsigtig mørk grå eller sort matrix. Normalt er visualisering af ekstracellulære strukturer umulig på grund af deres gennemsigtighed. Stromaen kan betingelsesmæssigt opdeles i underlag: anterior (placeret direkte under Bowman-membranen og udgør 10% af stromaets tykkelse), anterior, middle og posterior.

Den gennemsnitlige densitet af keratocytter er højere i den forreste stroma, gradvist falder deres antal mod de bageste lag. Tætheden af cellerne i den forreste stroma er næsten dobbelt så stor som for cellerne i den bageste stroma (hvis densiteten af cellerne i den forreste stroma er taget som 100%, så er densiteten af cellerne i den bageste stroma ca. 53,7%). I den fremre stroma har kerneocyternes kerne en rund bønformet form, og i den bakre ovale og mere langstrakte.

Kernerne af keratocytter kan variere i lysstyrke. Den forskellige evne til at reflektere lys afhænger af deres metaboliske tilstand. Lysere celler betragtes som aktiverede keratocytter ("stressceller"), hvis aktiviteter er rettet mod at opretholde indre hornhindehomostase. I norm og synsfelt er der enkeltaktiverede celler.

Nervefibre i hornhindenes fremre stroma visualiseres som lyse homogene bånd, der ofte danner bifurcationer.

Afdæmningsmembranen er normalt gennemsigtig og er ikke visualiseret ved konfokal mikroskopi.

Det posteriorepitel er et monolag af hexagonale eller polygonale flade celler med en ensartet lys overflade mod en baggrund af forskellige mørke intercellulære grænser.

Enheden giver mulighed for manuel eller automatisk beregning af celletæthed, deres område og variabilitetskoefficient.

Patologiske ændringer i hornhindeopbygningen

Keratoconus er karakteriseret ved signifikante ændringer i hornhindens anteriorepitel og stroma.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]