Konfokal levetidsmikroskopi af hornhinden

Konfokalmikroskopi af hornhinden er en af de moderne forskningsmetoder; den muliggør intravital overvågning af hornhinden med vævsvisualisering på cellulært og mikrostrukturelt niveau.

Denne metode, på grund af mikroskopets originale design og dets høje opløsningsevne, muliggør visualisering af levende hornhindevæv, måling af tykkelsen af hvert af dets lag og vurdering af graden af morfologiske lidelser.

Formålet med hornhindekonfokalmikroskopi

At karakterisere de morfologiske ændringer i hornhinden, der forekommer ved forskellige inflammatoriske og dystrofiske sygdomme, samt som følge af kirurgiske indgreb og eksponering for CL.

Morfologiske undersøgelsesdata er nødvendige for at vurdere sværhedsgraden af den patologiske proces, behandlingens effektivitet og for at bestemme taktikken for patientbehandling.

Indikationer for proceduren

• Inflammatoriske sygdomme i hornhinden ( keratitis ).
• Dystrofiske sygdomme i hornhinden ( keratokonus, Fuchs dystrofi osv.).
• Tørre øjne syndrom.
• Tilstande efter kirurgiske indgreb på hornhinden (penetrerende hornhindetransplantation, keratorefraktive operationer).
• Tilstande forbundet med brug af kontaktlinser.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Forberedelse

Denne undersøgelse kan udføres uden brug af bedøvelsesmidler. En dråbe immersionsvæske placeres på objektivlinsen på det konfokale mikroskop. Dette eliminerer direkte kontakt mellem linsen og hornhinden og minimerer risikoen for beskadigelse af epitelet.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Teknik Konfokal mikroskopi af hornhinden

Undersøgelsen udføres ved hjælp af et ConfoScan 4 (Nider) konfokalmikroskop med en forstørrelse på 500 gange. Apparatet gør det muligt at undersøge hornhinden i hele dens tykkelse.

Størrelsen på det undersøgte område er 440 × 330 μm, scanningslagets tykkelse er 5 μm. Linsen med en dråbe gel føres mod hornhinden, indtil den berører den, og installeres således, at tykkelsen af det immersionsvæskelag er 2 mm. Apparatets design gør det muligt at undersøge hornhinden i den centrale zone og dens paracentrale områder.

Kontraindikationer til proceduren

En relativ kontraindikation er alvorlig øjenirritation på grund af en akut inflammatorisk proces.

[ 10 ], [ 11 ]

Normal ydeevne

Normalt morfologisk billede af hornhinden

Det forreste epitel består af 5-6 lag celler. Den gennemsnitlige tykkelse af hele epitelet er cirka 50 µm. Ifølge den morfologiske struktur skelnes følgende lag (indefra og ud): basale, sylformede celler og overfladiske.

• Det inderste (basale) lag er repræsenteret af små, tætte, cylindriske celler uden en synlig cellekerne. Basalcellernes grænser er klare og klare.
• Mellemlaget består af 2-3 lag af tornede (vingede) celler med dybe invaginationer, hvori udvækster fra naboceller er indlejret. Mikroskopisk er cellegrænserne ret tydeligt adskilte, og kernerne er muligvis ikke definerede eller kan være uklare.
• Epitelets overfladiske lag er repræsenteret af et eller to lag polygonale celler med klare grænser og homogen tæthed. Kernerne er normalt lysere end cytoplasmaet, hvori en perinukleær mørk ring også kan skelnes.

Blandt cellerne i det overfladiske lag skelnes der mellem mørke og lyse celler. Øget reflektionsevne af epitelceller indikerer et fald i deres stofskiftehastighed og deres begyndende afskalning.

Bowmans membran er en transparent struktur, der ikke reflekterer lys, så det er normalt umuligt at visualisere den med konfokalmikroskopi.

Den subbasale nerveplexus er placeret under Bowmans membran. Normalt fremstår nervefibre som lyse striber, der løber parallelt på en mørk baggrund og berører hinanden. Reflektionsevnen (reflektionsevnen) kan være ujævn langs fiberen.

Hornhindens stroma optager 80 til 90% af hornhindens tykkelse og består af cellulære og ekstracellulære komponenter. De vigtigste cellulære elementer i stroma er keratocytter; de udgør cirka 5% af volumenet.

Et typisk mikroskopisk billede af stroma omfatter flere lyse, uregelmæssige, ovale legemer (keratocytkerner), der ligger i tykkelsen af en transparent mørkegrå eller sort matrix. Normalt er visualisering af ekstracellulære strukturer umulig på grund af deres gennemsigtighed. Stroma kan betinget opdeles i underlag: anterior (placeret direkte under Bowmans membran og udgør 10% af stromatykkelsen), anterior-midterste, midterste og posteriore.

Den gennemsnitlige tæthed af keratocytter er højere i det anteriore stroma og falder gradvist mod de posteriore lag. Tætheden af anteriore stromale celler er næsten dobbelt så høj som tætheden af posteriore stromale celler (hvis tætheden af anteriore stromale celler sættes til 100%, vil tætheden af posteriore stromale celler være omkring 53,7%). I det anteriore stroma har keratocytkernerne en afrundet bønneformet form, mens de i det posteriore stroma er ovale og mere aflange.

Keratocytkerner kan variere i lysstyrke. Den forskellige evne til at reflektere lys afhænger af deres metaboliske tilstand. Lysere celler betragtes som aktiverede keratocytter ("stress"-celler), hvis aktivitet er rettet mod at opretholde hornhindens interne homeostase. I norm- og synsfeltet findes enkelte aktiverede celler.

Nervefibre i det forreste hornhindestroma visualiseres som lyse homogene bånd, der ofte danner bifurkationer.

Descemets membran er normalt transparent og kan ikke visualiseres ved konfokalmikroskopi.

Det posteriore epitel er et monolag af hexagonale eller polygonale flade celler med en ensartet lys overflade mod en baggrund af klare mørke intercellulære grænser.

Enheden har mulighed for manuelt eller automatisk at beregne celletæthed, deres areal og variabilitetskoefficient.

Patologiske ændringer i hornhindens struktur

Keratokonus er karakteriseret ved betydelige ændringer i hornhindens forreste epitel og stroma.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]