Diagnose af herpes

Diagnose af herpes er baseret på afviklingen af klassiske virusudskillelse i følsomme cellekulturer, immunofluorescens og serologiske metoder, udførelse colposcopic undersøgelser ved hjælp af moderne molekylærbiologiske metoder (PCR, dot-hybridisering), som gør det muligt at diagnosticere alle herpesvirus gruppe, herunder HHV-6 og HHV-7 typer.

Metoder til laboratoriediagnose af herpetic infektion

De vigtigste metoder sigte på at udskille HSV eller påvise viruspartikler og / eller deres komponenter	Hjælpemetoder rettet mod at detektere antistoffer mod HSV i biologiske væsker i menneskekroppen
Isolering af HSV i følsomme kulturer af celler og dyr Direkte og immunelektronmikroskopi Direkte og indirekte MFA-muligheder IFA Molekylære biologiske metoder Latex agglutineringsreaktion	Neutraliseringsreaktion RSK Bestemmelse af antistoffer mod ikke-strukturelle proteiner af HSV-1,2

Det er vist, at 76% af patienterne har genital herpes (GH) forårsaget af HSV-2 og i 24% - HSV-1-type. Og GG som monoinfektion forekom kun hos 22% af patienterne, i 78% af tilfældene blev mikrobielle foreninger påvist. Hos 46% af patienterne blev parasitocenose forårsaget af to patogener påvist, herunder klamydia blev påvist i 40% af tilfældene. Mindre ofte i udstødningerne bestemt gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

I 27% af patienterne var parasitocenose repræsenteret af tre og 5,2% af fire patogener. Og oftere var der en kombination af chlamydia med Gardnerella og Candida svampe. Disse data begrunder behovet for en grundig bakteriologisk undersøgelse af patienter YY at identificere kombinationerne patogene middel, samt en dybtgående undersøgelse af patogenesen af blandede infektioner i urinvejene, som åbner mulighed for en differentieret kompleks terapi af HSV-infektion.

Materialer, der skal studeres i isolering af HSV afhængigt af lokalisering af herpetiske læsioner

Lokalisering af læsioner	Indhold af vesikler	Celleskrabning				SMZ	Aspirere fra bronchi	Biopsiprøve	Blod
		1	2	3	4
Læder	+								+
øjne			+						+
Kønsorganer				+					+
Anus	+				+				+
Mund	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lunger		+					+		+
Leveren								+	+
Medfødt herpes	+	+	+				+		+

Metoder til laboratoriediagnose af cytomegalovirusinfektion

Metoder	Tid kræves for at få resultater	Noter
Virologiske
Elektronmikroskopi	3 timer	Malodostupen
Isolering af viruset i cellekultur (CPD)	4-20 dage	Standard, Langsom
Immunofluorescerende farvning af tidlig AH med monoklonale antistoffer	6 timer	Mindre specifikke
TSITOLOGICHESKIY	2-3 timer	Mindre specifikke
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dage	Standard
Ssubsistence	1 dag	Tidskrævende
RIF	6 timer	Enkel, specifik
NRIF	6 timer	Kompleks
RIMF	6 timer	Kompleks
IFA (IgM, TO)	6 timer	Hurtig, enkel
Immunoblotanalyse	6 timer	Dyrt
Molekylærbiologiske
MG	5-7 dage	Dyrt, tidskrævende
PCR	3 timer	Dyrt

Metoder til diagnosticering af herpes zoster-virus

Diagnostiske metoder	Laboratoriemetoder metoder
INDIREKTE
Tildeling	Stofkultur, kyllingembryoner, forsøgsdyr, samdyrkning med permissive celler eller hjælpervirus
Identifikation af isolater	Neutraliseringsreaktion, DSC, IF, IPPE, reaktion af bundfald isolater, agglutination, IF
LIGE
Cytologi	Smears: farve immunofluorescens
Histologi	Pathomorfologi af cellen
Struktur	Embryonisk mikroskopi, immunoelektronisk mikroskopi
Bestemmelse af antigener	IF, PIÉF, RIM, IFA
Bestemmelse af lokal produktion af antistoffer	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekylære biologiske fremgangsmåder	Molekylær hybridisering, PCR

Laboratoriediagnosticering af infektion forårsaget af herpes zostervirus

Diagnostiske problemer	Metoder	Forventede resultater
Akut primær infektion	1	Påvisning efter 2 timer
	2	Antistoffernes niveau vokser langsomt
	3	Til stede 3 dage efter infektion
Akut reaktiveret infektion	1	Påvisning af ULV om 2 timer
	2	Antistoffernes niveau vokser langsomt
	4	Til stede 4 dage efter udseende af udslæt

1. bestemmelsen i væsken af vesikler af WIEF;
2. serologi: DSC, ELISA, med henblik på at identificere
3. Serologi: ELISA, der har til formål at detektere IgM;
4. serologi: ELISA, der har til formål at detektere IgA, IgM.

Metoder til at indikere immunrespons af en infektion som følge af herpes zoster-viruset

Tilgang	Fremgangsmåde
Påvisning af forøget antistoftiter i den anden serum	RSK, RTGA, RPGA, neutraliseringsreaktion IF, RIM, ELISA
Påvisning af Ig G, Ig En klassespecifik antistof i den første serumprøve	IFA, IF, RIM, latex-agglutination

Fortolkning af resultater af serologisk undersøgelse af patientsera på herpesvirusinfektioner (ELISA)

Navn på infektion / markør	Gennemsnitlige tærskler for infektioner
	Analyseresultater	Fortolkning
Cytomegali Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positiv 1-6 Positiv 6-10 Positiv> 10 Negativ Positiv 100-300 Negativ <90 Tvivlsom 90-100	Remission Forværring af sygdommen Akut fase af sygdommen Ingen infektion (sygdom) Akut fase af sygdommen Gentag analysen efter 2-3 uger
Herpes simple 1,2 serotyper Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positiv 100-400 Positiv 400-800 Positiv> 800 Negativ <100	Remission Forværring af sygdommen Akut fase af sygdommen Ingen infektion (sygdom)

Tabellen præsenterer de vigtigste metoder til laboratoriediagnostik af herpesvirusinfektioner og anbefaler også biologiske materialer, der studeres i isolering af HSV, under hensyntagen til lokalisering af herpetic læsioner

Pålidelig er tildelingen af herpes simplex og CMV gennem infektionen af følsomme cellekulturer. Ved virologisk undersøgelse af 26 patienter i tilbagefaldstiden blev HSV således isoleret på en følsom Vero-cellekultur i 23 tilfælde (88,4%). I inficerede kulturer blev der observeret et mønster af cytopatisk virkningskarakteristik af HSV-dannelsen af multinucleaterede gigantiske celler eller akkumuleringen af afrundede og forstørrede celler i form af klaser. I 52,1% af tilfældene var det muligt at påvise foci for den cytopatiske virkning af viruset ved 16-24 timer efter infektion. Ved 48-72 timers inkubering af inficerede kulturer steg andelen af materialer, der forårsager specifik celle ødelæggelse til 87%. Og kun i 13% af tilfældene blev positive resultater påvist 96 timer efter infektion og mere eller med gentagen passage.

Metoder til laboratoriediagnose af generaliseret herpetic infektion

De vigtigste metoder var rettet mod detektion (isolering) af herpesvirus, deres partikler og deres komponenter	Hjælpemetoder rettet mod at detektere antistoffer mod herpesvirus i biologiske væsker, detekterer enzymatiske skift i blodserum
Isolering af Herpes virus på modtagelige cellekulturer og dyr Direkte og immun-elektronmikroskopi Direkte og indirekte immunoperoxidase metode udførelsesformer Direkte og indirekte fluorescerende antistof teknik optioner muligheder ELISA udførelsesformer for molekylær (DNA-DNA) hybridiserende Polymerase Chain Reaction Reaction latexagglutinering	Neutralisering reaktion komplementbindingsreaktion reaktion latexagglutinering Indirekte fluorescerende antistof metode udførelsesform Indirekte immunoperoxidase fremgangsmådevariant Udførelsesformer ELISA Method immune blotting radial fiksering af komplement Metode Bestemmelse af alanin- og aspartat niveauer

Til diagnosticering af infektiøs mononukleose (infektion forårsaget af VEB) anvendes serologiske metoder. Reaktionen af Paul Bunnel med erythrocytter af en ram, en diagnostisk titer på 1:28 og derover med en enkelt undersøgelse af serum eller en 4 gange stigning i antistoffer ved undersøgelsen af parret sera. Brug Goff-Bauer reaktionen med en suspension af 4% formaliserede røde blodlegemer fra hesten. Resultatet tages i betragtning efter 2 minutter, med reaktion er infektiøs mononukleose meget specifik.

I øjeblikket udvikles et enzymimmunoassay (ELISA) til diagnosticering af infektiøs mononukleose. I dette tilfælde bestemmes IgG- og IgM-antistoffer i patientens serum ved at inkubere det med lymfoblaster inficeret med EBV efterfulgt af behandling med fluorescerende antistoffer. I den akutte periode af sygdommen bestemmes antistoffer mod viruskapsidantigenet i en titer på 1: 160 og derover.

Når der anvendes et antal importerede kommercielle testsystemer i IFA kan identificere: antistoffer mod ant Egan EBV kappeantistoffer til tidlig antigen af EBV, den samlede antistof til et tidligt antigen af EBV, bestemt i den akutte fase af sygdommen og i kernen og i cytoplasmaet, og den begrænsede antistof EBV tidligt, bestemt i den akutte fase af sygdommen og i kernen og i cytoplasmaet af celler, der afgrænses antistoffer mod EBV tidligt antigen, bestemt midt i sygdommen kun i cytoplasmaet i celler, og antistoffer til EBV-kerneantigen. Brugen af disse testsystemer muliggør differentiel diagnose af en række sygdomme forbundet med EBV.

Efter positiv ELISA til identifikation af antistofferne EBV giver immunoblot bekræfter reaktion, som detekterer tilstedeværelsen af antistoffer til at adskille EBV markørproteiner (p-proteiner): P23, P54, p72 (tilstedeværelsen af proteinet antyder muligheden for reproduktion EBV), p 138. Said Ovenstående laboratoriemetoder bruges til at kontrollere effektiviteten af behandlingen.

Sensibiliteten af de virologiske metoder er 85-100%, specificiteten er 100%, studietiden er 2-5 dage. I praksis anvendes fremgangsmåden til direkte immunofluorescens (PIF) med polyklonale eller monoklonale antistoffer mod HSV-1 og HSV-2. UIF-metoden kan let gengives i et konventionelt klinisk laboratorium, det er ikke dyrt, følsomheden er over 80%, specificiteten er 90-95%. Ved immunfluorescerende mikroskopi afslørede tilstedeværelsen af cytoplasmiske inklusioner, morfologiske træk, procentdelen af inficerede celler i smears, skraber urethral, cervikalkanalen, cervix, rectum.

UIF-metoden giver en ide om de morfologiske egenskaber hos celler og ændringer i lokaliseringen af HSV antigener. Ud over direkte tegn på celleskader ved herpesvirus (påvisning af specifik luminescens) er der indirekte tegn på herpesinfektion i henhold til UIF-dataene:

• aggregering af nukleart materiale, eksfoliering af karyolma;
• Tilstedeværelsen af den såkaldte. Kerner "huller", når kun en karyolemma forbliver fra kernen af cellen;
• Tilstedeværelsen af intranukleære indeslutninger - Caudrys kalv.

Ved indstilling af UIF læge modtager ikke kun kvalitet, men også en kvantitativ vurdering af de inficerede celler, som vi har været vant til at evaluere effektiviteten af antiviral behandling med acyclovir (AC). Således blev 80 patienter med simpel genital herpes (GG) undersøgt af UIF-metoden i dynamik. Det er vist, at hvis, før behandling med acyclovir i udstrygninger 88% af patienterne havde en høj procentdel af inficerede celler (50-75% og derover), efter et forløb acyclovir i smears 44% af patienter med sunde celler påvist i 31% af tilfældene er markeret individuelle inficerede celler og 25% af patienterne havde op til 10% af inficerede celler.

Indholdet af inficerede celler i udstødninger (PIF-reaktion) hos patienter med kønsherpes, behandlet med acyclovir

Sygdomsperioder	Procentdel i udtværinger
	Inficerede celler					Normale celler
	Mere end 75%	50-75%	40-50%	10%	Enkeltceller i n / sp
Tilbagefald (før behandling)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remission (efter behandling)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Brug af mange års gensidig fond og metoden til dot-hybridisering observeret næsten 100% af aftalen mellem resultaterne af undersøgelsen. Det skal bemærkes, at for at øge pålideligheden af diagnosen af GH, især i tilfælde, hvor der er subklinisk og malomanifestnyh former for herpes, anbefales det at bruge 2-3 metode laboratoriediagnoser, især i forbindelse med behandlingen gravide kvinder, kvinder med obstetrisk historie dårligt stillede, folk med uspecificeret gynækologisk diagnose.

Så når PCR-diagnose af viralbakterielle infektioner i urogenitalkanalen er det nødvendigt at evaluere de opnåede positive resultater under hensyntagen til anamnese, tilstedeværelsen (eller fraværet) af specifikke kliniske symptomer på sygdommen. Hvis chlamydia detekteres med PCR, så er det i dette tilfælde muligt at tale om infektion og løse problemerne med terapi i overensstemmelse hermed. I tilfælde af påvisning af mycoplasmaer (ureaplasmas) er opportunistiske patogener, at bekræfte diagnosen skal gennemføre kultur yderligere undersøgelser, t. E. Crop materiale fra en patient følsomme over for cellekulturer. Først når positive resultater opnås i kulturanalysen, kan vi tale om laboratoriebekræftelse af diagnosen mycoplasmosis. Den samme metode vil muliggøre, om nødvendigt, at bestemme de isolerede mycoplasmas følsomhed over for hyppigt anvendte lægemidler (antibiotika, fluorquinoloner osv.).

Måske en en-fase infektion med flere vira af familien Nepresviridae. Ofte opdagede vi infektion hos en patient med HSV-1, HSV-2 og CMV virus. Meget hyppigere inficeret med flere herpesvirus var patienter med kliniske og laboratorieangivelser af sekundær IDS (patienter med onkohematologisk, onkologisk, HIV-inficeret). Det er således vist, at kliniske og immunologiske lidelser, der udvikler sig i hiv-infektion, ledsages af en stigning i antallet af herpesviruser, som detekteres ved molekylærhybridiseringsmetoden. I denne prognostisk mest betydningsfulde kan betragtes som en kompleks en-fase detektion af DNA af HSV-1, CMV og HHV-6 type.

[1], [2], [3]