Hæmatopoietiske stamceller

Hæmatopoietiske stamceller (HSC'er), ligesom mesenkymale progenitorceller, er karakteriseret ved multipotens og giver anledning til cellelinjer, hvis sidste elementer danner blodets dannede elementer, såvel som en række specialiserede vævsceller i immunsystemet.

Hypotesen om eksistensen af en fælles forløber for alle blodlegemer, såvel som selve udtrykket "stamcelle", tilhører A. Maksimov (1909). Potentialet for dannelse af cellemasse i HSC er enormt - knoglemarvsstamceller producerer dagligt 10 celler, der udgør de dannede elementer af perifert blod. Selve kendsgerningen om eksistensen af hæmatopoietiske stamceller blev etableret i 1961 i eksperimenter med genoprettelse af hæmatopoiese hos mus, der modtog en dødelig dosis radioaktiv bestråling, der ødelægger knoglemarvsstamceller. Efter transplantation af syngene knoglemarvsceller til sådanne dødeligt bestrålede dyr, blev der fundet diskrete foci af hæmatopoiese i recipienternes milt, hvis kilde var enkeltstående klonogene forløberceller.

Derefter blev hæmatopoietiske stamcellers evne til selvvedligeholdelse og dermed at fungere som hæmatopoiese i ontogeneseprocessen bevist. I den embryonale udvikling er HSC'er kendetegnet ved høj migrationsaktivitet, som er nødvendig for deres bevægelse til dannelseszonerne for hæmatopoietiske organer. Denne egenskab ved HSC'er bevares også i ontogenesen - på grund af deres konstante migration sker der en permanent fornyelse af puljen af immunkompetente celler. HSC'ers evne til at migrere, trænge igennem histohæmatiske barrierer, implantere sig i væv og klonogen vækst tjente som grundlag for transplantation af knoglemarvsceller i en række sygdomme forbundet med patologi i det hæmatopoietiske system.

Ligesom alle stamcelle-ressourcer er hæmatopoietiske stamceller til stede i deres niche (knoglemarv) i meget små mængder, hvilket forårsager visse vanskeligheder med deres isolering. Immunfænotypisk karakteriseres humane HSC'er som CD34+NK-celler, der er i stand til at migrere ind i blodbanen og befolke immunsystemets organer eller genbefolke knoglemarvsstroma. Det skal klart forstås, at HSC'er ikke er de mest umodne celler i knoglemarven, men stammer fra forstadier, som inkluderer sovende fibroblastlignende CD34-negative celler. Det er blevet fastslået, at celler med CD34-fænotypen er i stand til at trænge ind i den generelle blodbane, hvor de ændrer deres fænotype til CD34+, men ved omvendt migration ind i knoglemarven, under påvirkning af mikromiljøet, bliver de igen CD34-negative stamcelleelementer. I hviletilstand reagerer CD34~-celler ikke på parakrine regulatoriske signaler fra stroma (vækstfaktorer, cytokiner). I situationer, der kræver øget intensitet af hæmatopoiese, reagerer stamceller med CD34-fænotypen imidlertid på differentieringssignaler ved at danne både hæmatopoietiske og mesenkymale progenitorceller. Hæmatopoiese sker gennem direkte kontakt mellem HSC'er og cellulære elementer i knoglemarvsstroma, repræsenteret af et komplekst netværk af makrofager, retikulære endotelceller, osteoblaster, stromale fibroblaster og ekstracellulær matrix. Knoglemarvens stromale basis er ikke blot en matrix eller et "skelet" for hæmatopoietisk væv; den udfører finregulering af hæmatopoiese på grund af parakrine regulatoriske signaler fra vækstfaktorer, cytokiner og kemokiner, og tilvejebringer også adhæsive interaktioner, der er nødvendige for dannelsen af blodlegemer.

Det konstant fornyende hæmatopoiesesystem er således baseret på en polypotent (fra hæmatopoiesesynspunkt) hæmatopoietisk stamcelle, der er i stand til langvarig selvvedligeholdelse. I forbindelse med commitment-processen gennemgår HSC'er primær differentiering og danner kloner af celler, der adskiller sig i cytomorfologiske og immunofænotypiske egenskaber. Den sekventielle dannelse af primitive og committede progenitorceller ender med dannelsen af morfologisk identificerbare progenitorceller fra forskellige hæmatopoietiske linjer. Resultatet af de efterfølgende stadier af den komplekse flertrinsproces af hæmatopoiese er modning af celler og frigivelse af modne dannede elementer i det perifere blod - erytrocytter, leukocytter, lymfocytter og trombocytter.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]

Kilder til hæmatopoietiske stamceller

Hæmatopoietiske stamceller anses for at være den mest undersøgte stamcellekilde, hvilket i høj grad skyldes deres kliniske anvendelse i knoglemarvstransplantation. Ved første øjekast ved man en hel del om disse celler. Til en vis grad er dette sandt, da mellemliggende og modne efterkommere af HSC'er er de mest tilgængelige cellulære elementer, som hver især (erytrocytter, leukocytter, lymfocytter, monocytter/makrofager og blodplader) er blevet omhyggeligt undersøgt på alle niveauer - fra lys- til elektronmikroskopi, fra biokemiske og immunfænotypiske karakteristika til identifikation ved hjælp af PCR-analysemetoder. Overvågning af morfologiske, ultrastrukturelle, biokemiske, immunfænotypiske, biofysiske og genomiske parametre for HSC'er har dog ikke givet svar på mange problematiske spørgsmål, hvis løsning er nødvendig for udviklingen af celletransplantation. Mekanismerne til stabilisering af hæmatopoietiske stamceller i en sovende tilstand, deres aktivering, indtræden i stadiet med symmetrisk eller asymmetrisk deling, og vigtigst af alt, engagement i dannelsen af sådanne funktionelt forskellige dannede elementer i blodet som erytrocytter, leukocytter, lymfocytter og blodplader er endnu ikke blevet fastslået.

Tilstedeværelsen i knoglemarven af celler med CD34-fænotypen, som er progenitorer til både mesenkymale og hæmatopoietiske stamceller, rejste spørgsmålet om eksistensen af de tidligste forstadier til cellulær differentiering til stromale og hæmatopoietiske linjer, tæt på CD34-negative celler. Den såkaldte langtidskulturinitierende celle (LTC-IC) blev opnået ved hjælp af langtidsdyrkningsmetoden. Levetiden for sådanne forstadieceller med kolonidannende aktivitet på stromal basis af knoglemarv med en bestemt kombination af vækstfaktorer overstiger 5 uger, mens levedygtigheden af dedicated colony-forming units (CFU) i kultur kun er 3 uger. I øjeblikket betragtes LTC-IC som en funktionel analog af HSC'er, da omkring 20% af LTC-IC med et højt repopulationspotentiale er karakteriseret ved CD34+CD38-fænotypen og udviser en høj kapacitet til selvfornyelse. Sådanne celler findes i human knoglemarv med en frekvens på 1:50.000. Myeloid-lymfoid-initierende celler, som er opnået under langvarige (15 uger) dyrkningsbetingelser, bør dog anerkendes som de nærmeste til HSC'er. Sådanne celler, betegnet LTC, er blandt cellerne i knoglemarven i den menneskelige hjerne, findes 10 gange mindre hyppigt end LTC-IC og danner cellelinjer af både myeloide og lymfoide hæmatopoietiske afstamninger.

Selvom mærkning af hæmatopoietiske stamceller med monoklonale antistoffer efterfulgt af immunfænotypisk identifikation er den primære metode til genkendelse og selektiv sortering af hæmatopoietiske celler med stamcellepotentiale, er den kliniske anvendelse af de således isolerede HSC'er begrænset. Blokering af CD34-receptoren eller andre markørantigener med antistoffer under immunpositiv sortering ændrer uundgåeligt egenskaberne af den celle, der isoleres med dens hjælp. Immunnegativ isolering af HSC'er på magnetiske søjler anses for at være mere foretrukket. I dette tilfælde anvendes dog normalt monoklonale antistoffer fikseret på en metalbærer til sortering. Derudover, hvilket er vigtigt, er begge metoder til HSC-isolering baseret på fænotypiske snarere end funktionelle egenskaber. Derfor foretrækker mange forskere at anvende analysen af klonogene parametre for HSC'er, hvilket gør det muligt at bestemme modenhedsgraden og differentieringsretningen for progenitorceller ud fra koloniernes størrelse og sammensætning. Det er kendt, at antallet af celler og deres typer i kolonien falder under bindingsprocessen. Den hæmatopoietiske stamcelle og dens tidlige dattercelle, kaldet "granulocyt-erytrocyt-monocyt-megakaryocyt-kolonidannende enhed" (CFU-GEMM), skaber store multilineage-kolonier i kultur, der indeholder henholdsvis granulocytter, erytrocytter, monocytter og megakaryocytter. Granulocyt-monocyt-kolonidannende enhed (CFU-GM), der er placeret nedstrøms langs commitment-linjen, danner kolonier af granulocytter og makrofager, og granulocyt-kolonidannende enhed (CFU-G) danner kun en lille koloni af modne granulocytter. Den tidlige erytrocyt-forløber, den burst-dannende enhed af erytrocytter (CFU-E), er kilden til store erytrocyt-kolonier, og den mere modne kolonidannende enhed af erytrocytter (CFU-E) er kilden til små erytrocyt-kolonier. Generelt, når celler vokser på halvfaste medier, kan celler identificeres, der danner seks typer myeloide kolonier: CFU-GEMM, CFU-GM, CFU-G, CFU-M, BFU-E og CFU-E.

Udover hæmatopoietiske derivater indeholder ethvert kildemateriale til isolering af HSC'er imidlertid et betydeligt antal ledsagende celler. I denne henseende er en forudgående oprensning af transplantatet først og fremmest nødvendig fra aktive celler i donorens immunsystem. Normalt anvendes immunselektion til dette formål, baseret på ekspressionen af specifikke antigener af lymfocytter, hvilket gør det muligt at isolere og fjerne dem ved hjælp af monoklonale antistoffer. Derudover er der udviklet en immunorosetmetode til T-lymfocyt-udtømning af knoglemarvstransplantationer, som er baseret på dannelsen af komplekser af CD4+ lymfocytter og specifikke monoklonale antistoffer, der effektivt fjernes ved hjælp af aferese. Denne metode sikrer produktion af oprenset cellulært materiale med 40-60% indhold af hæmatopoietiske stamceller.

En stigning i antallet af progenitorceller på grund af fjernelse af modne, dannede elementer af blodet fra leukafereseproduktet opnås ved modstrømscentrifugering efterfulgt af filtrering (i nærvær af en chelator - trinatriumcitrat) gennem kolonner indeholdende nylonfibre overtrukket med humant immunglobulin. Den sekventielle anvendelse af disse to metoder sikrer fuldstændig oprensning af transplantatet fra blodplader, 89% fra erytrocytter og 91% fra leukocytter. På grund af et signifikant fald i tabet af HSC'er kan niveauet af CD34+ celler i den samlede cellemasse øges til 50%.

De isolerede hæmatopoietiske stamcellers evne til at danne kolonier af modne blodlegemer i kultur anvendes til funktionel karakterisering af cellerne. Analyse af de dannede kolonier gør det muligt at identificere og kvantificere typerne af progenitorceller, graden af deres binding og fastlægge retningen af deres differentiering. Klonogen aktivitet bestemmes i halvfaste medier på methylcellulose, agar, plasma eller fibringel, hvilket reducerer cellernes migrationsaktivitet og forhindrer deres binding til overfladen af glas eller plast. Under optimale dyrkningsbetingelser udvikles kloner fra en enkelt celle på 7-18 dage. Hvis en klon indeholder færre end 50 celler, identificeres den som en enkelt klynge; hvis antallet af celler overstiger 50, identificeres den som en koloni. Antallet af celler, der er i stand til at danne en koloni, tages i betragtning (kolonidannende enheder - CFU eller kolonidannende celler - COC). Det skal bemærkes, at parametrene for CFU og COC ikke svarer til antallet af HSC'er i cellesuspensionen, selvom de korrelerer med det, hvilket endnu engang understreger behovet for at bestemme den funktionelle (kolonidannende) aktivitet af HSC'er in vitro.

Blandt knoglemarvsceller har hæmatopoietiske stamceller det højeste proliferative potentiale, hvilket gør, at de danner de største kolonier i kultur. Antallet af sådanne kolonier foreslås indirekte at bestemme antallet af stamceller. Efter dannelsen af kolonier in vitro, der overstiger 0,5 mm i diameter og har et celletal på mere end 1000, testede forfatterne sådanne celler for resistens over for subletale doser af 5-fluorouracil og undersøgte deres evne til at repopulere knoglemarven hos dødeligt bestrålede dyr. Ifølge de specificerede parametre var de isolerede celler næsten umulige at skelne fra HSC'er og fik forkortelsen HPP-CFC - kolonidannende celler med højt proliferativt potentiale.

Søgningen efter bedre isolering af hæmatopoietiske stamceller fortsætter. Hæmatopoietiske stamceller er dog morfologisk set lig lymfocytter og repræsenterer et relativt homogent sæt af celler med næsten runde kerner, fint dispergeret kromatin og en lille mængde svagt basofil cytoplasma. Deres nøjagtige antal er også vanskeligt at bestemme. Det antages, at HSC'er i human knoglemarv forekommer med en hyppighed på 1 pr. 106 kerneholdige celler.

Identifikation af hæmatopoietiske stamceller

For at forbedre kvaliteten af identifikationen af hæmatopoietiske stamceller udføres en sekventiel eller samtidig (på en multikanalsorterer) undersøgelse af spektret af membranbundne antigener, og i HSC'er bør CD34+CD38-fænotypen kombineres med fraværet af lineære differentieringsmarkører, især antigener fra immunkompetente celler, såsom CD4, overfladeimmunoglobuliner og glykophorin.

Næsten alle fænotypebestemmelsesskemaer for hæmatopoietiske stamceller inkluderer bestemmelse af CD34-antigenet. Dette glykoprotein med en molekylvægt på ca. 110 kDa, der bærer adskillige glycosyleringssteder, udtrykkes på plasmacellemembranen efter aktivering af det tilsvarende gen lokaliseret på kromosom 1. CD34-molekylets funktion er forbundet med L-selektin-medieret interaktion mellem tidlige hæmatopoietiske progenitorceller og den stromale basis i knoglemarven. Det skal dog huskes, at tilstedeværelsen af CD34-antigenet på celleoverfladen kun tillader en foreløbig vurdering af HSC-indholdet i cellesuspensionen, da det også udtrykkes af andre hæmatopoietiske progenitorceller, såvel som stromale celler og endotelceller i knoglemarven.

Under differentieringen af hæmatopoietiske progenitorceller reduceres CD34-ekspressionen permanent. Erytrocyt-, granulocyt- og monocytiske progenitorceller udtrykker enten CD34-antigen i svag grad eller udtrykker det slet ikke på deres overflade (CD34-fænotype). CD34-antigen detekteres ikke på overflademembranen af differentierede knoglemarvsceller og modne blodlegemer.

Det skal bemærkes, at i dynamikken i differentieringen af hæmatopoietiske progenitorceller falder ikke kun niveauet af CD34-ekspression, men også ekspressionen af CD38-antigenet, et integralt membranglykoprotein med en molekylvægt på 46 kDa, som har NAD-glycohydrolase- og ADP-ribosylcyclaseaktivitet, øges progressivt, hvilket antyder dets deltagelse i transport og syntese af ADP-ribose. Således er der mulighed for dobbelt kontrol af graden af commitment af hæmatopoietiske progenitorceller. Populationen af celler med CD34+CD38+ fænotypen, som udgør fra 90 til 99% af CD34-positive knoglemarvsceller, indeholder progenitorceller med begrænset proliferativt og differentierende potentiale, hvorimod celler med CD34+CD38 fænotypen kan gøre krav på rollen som HSC.

Knoglemarvscellepopulationen beskrevet ved formlen CD34+CD38- indeholder faktisk et relativt stort antal primitive stamceller, der er i stand til at differentiere i myeloid og lymfoid retning. Under langvarig dyrkning af celler med CD34+CD38- fænotypen er det muligt at opnå alle modne, dannede elementer af blodet: neutrofiler, eosinofiler, basofiler, monocytter, megakaryocytter, erytrocytter og lymfocytter.

Det er relativt nylig blevet fastslået, at CD34-positive celler udtrykker to yderligere markører, AC133 og CD90 (Thy-1), som også bruges til at identificere hæmatopoietiske stamceller. Thy-1-antigenet udtrykkes sammen med CD117-receptoren (c-kit) på CD34+ celler i knoglemarven, navlestrengen og perifert blod. Det er et overfladefosfatidylinositolbindende glykoprotein med en molekylvægt på 25-35 kDa, som deltager i celleadhæsionsprocesser. Nogle forfattere mener, at Thy-1-antigenet er en markør for de mest umodne CD34-positive celler. Selvreproducerende celler med CD34+Thy-1+ fænotypen giver anledning til langtidsdyrkede linjer med dannelse af datterceller. Det antages, at Thy-1-antigenet blokerer regulatoriske signaler, der forårsager celledelingsstop. Selvom CD34+Thy1+ celler er i stand til selvreproduktion og dannelse af langtidsdyrkede linjer, kan deres fænotype ikke udelukkende tilskrives HSC'er, da indholdet af Thy-1+ i den samlede masse af CD34-positive cellulære elementer er omkring 50%, hvilket betydeligt overstiger antallet af hæmatopoietiske celler.

Mere lovende til identifikation af hæmatopoietiske stamceller bør genkendes som AC133 - en antigenmarkør for hæmatopoietiske progenitorceller, hvis ekspression først blev detekteret på embryonale leverceller. AC133 er et transmembrant glykoprotein, der forekommer på overfladen af cellemembranen i de tidligste stadier af HSC-modning - det er muligt, at det endda tidligere end CD34-antigenet. I studier af A. Petrenko, V. Grishchenko (2003) blev det fastslået, at AC133 udtrykkes af op til 30% af CD34-positive embryonale leverceller.

Den ideelle fænotypiske profil for hæmatopoietiske stamceller består således, ifølge nuværende koncepter, af en cellulær omrids, hvis konturer bør omfatte konfigurationer af CD34-, AC133- og Thy-1-antigenerne, men der er ikke plads til de molekylære projektioner af CD38, HLA-DR og de lineære differentieringsmarkører GPA, CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

En variation af det fænotypiske portræt af HSC'er kan være kombinationen CD34+CD45RalowCD71low, da egenskaberne af de celler, der er beskrevet af denne formel, ikke adskiller sig fra de funktionelle parametre for celler med CD34+CD38-fænotypen. Derudover kan humane HSC'er identificeres ved de fænotypiske egenskaber CD34+Thy-l+CD38Iow/'c-kit /low - kun 30 sådanne celler genopretter hæmatopoiesen fuldstændigt i letalt bestrålede mus.

Den 40 år lange periode med intensiv forskning i HSC'er, som er i stand til både selvreproduktion og differentiering til andre cellulære elementer, begyndte med analysen af de generelle fænotypiske karakteristika for knoglemarvsceller, hvilket gjorde det muligt at retfærdiggøre brugen af knoglemarvstransplantation til behandling af forskellige patologier i det hæmatopoietiske system. Nye typer stamceller, der er opdaget senere, er endnu ikke blevet udbredt i klinisk praksis. Samtidig er stamceller fra navlestrengsblod og embryonal lever i stand til at udvide omfanget af celletransplantation betydeligt, ikke kun inden for hæmatologi, men også inden for andre områder af medicin, da de adskiller sig fra knoglemarvs-HSC'er i både kvantitative karakteristika og kvalitative træk.

Den mængde hæmatopoietisk stamcellemasse, der kræves til transplantation, udvindes normalt fra knoglemarv, perifert blod og navlestrengsblod samt embryonal lever. Derudover kan hæmatopoietiske progenitorceller opnås in vitro ved at multiplicere ESC'er med deres efterfølgende målrettede differentiering til hæmatopoietiske cellulære elementer. A. Petrenko, V. Grishchenko (2003) bemærker med rette betydelige forskelle i de immunologiske egenskaber og evnen til at genoprette hæmatopoiese hos HSC'er af forskellig oprindelse, hvilket skyldes det ulige forhold mellem tidlige pluripotente og sent engagerede progenitorceller indeholdt i deres kilder. Derudover er hæmatopoietiske stamceller opnået fra forskellige stamkilder karakteriseret ved kvantitativt og kvalitativt fuldstændig forskellige associationer af ikke-hæmatopoietiske celler.

Knoglemarv er allerede blevet en traditionel kilde til hæmatopoietiske stamceller. En knoglemarvscellesuspension udvindes fra ilium eller sternum ved vask under lokalbedøvelse. Den på denne måde opnåede suspension er heterogen og indeholder en blanding af HSC'er, stromale celleelementer, dedikerede progenitorceller fra myeloide og lymfoide linjer samt modne, dannede elementer fra blodet. Antallet af celler med CD34+ og CD34+CD38 fænotyper blandt knoglemarvsmononukleære celler er henholdsvis 0,5-3,6 og 0-0,5%. Perifert blod efter G-CSF-induceret mobilisering af HSC'er indeholder 0,4-1,6% CD34+ og 0-0,4% CD34+CD38.

Procentdelen af celler med immunfænotyperne CD34+CD38 og CD34+ er højere i navlestrengsblod - 0-0,6 og 1-2,6%, og deres maksimale antal detekteres blandt de hæmatopoietiske celler i den embryonale lever - henholdsvis 0,2-12,5 og 2,3-35,8%.

Kvaliteten af det transplanterede materiale afhænger dog ikke kun af antallet af CD34+ celler, det indeholder, men også af deres funktionelle aktivitet, som kan vurderes ud fra niveauet af kolonidannelse in vivo (knoglemarvsrepopulation hos letalt bestrålede dyr) og in vitro - ved kolonivækst på halvflydende medier. Det viste sig, at den kolonidannende og proliferative aktivitet af hæmatopoietiske progenitorceller med CD34+CD38 HLA-DR-fænotypen isoleret fra embryonal lever, føtal knoglemarv og navlestrengsblod signifikant overstiger det proliferative og kolonidannende potentiale af hæmatopoietiske celler i knoglemarven og perifert blod hos en voksen. Kvantitativ og kvalitativ analyse af HSC'er af forskellig oprindelse afslørede signifikante forskelle i både deres relative indhold i cellesuspensionen og funktionelle evner. Det maksimale antal CD34+ celler (24,6%) blev fundet i det transplanterede materiale opnået fra føtal knoglemarv. Knoglemarven hos en voksen indeholder 2,1% CD34-positive cellulære elementer. Blandt de mononukleære celler i det perifere blod hos en voksen har kun 0,5% CD34+ fænotypen, mens antallet i navlestrengsblod når 2%. Samtidig er den kolonidannende kapacitet af CD34+ celler i føtal knoglemarv 2,7 gange højere end den klonale vækstkapacitet af hæmatopoietiske celler i knoglemarven hos en voksen, og navlestrengsblodceller danner signifikant flere kolonier end hæmatopoietiske elementer isoleret fra det perifere blod hos voksne: henholdsvis 65,5 og 40,8 kolonier/105 celler.

Forskelle i proliferativ aktivitet og kolonidannende kapacitet hos hæmatopoietiske stamceller er ikke kun forbundet med forskellige grader af deres modenhed, men også med deres naturlige mikromiljø. Det er kendt, at proliferationsintensiteten og differentieringshastigheden for stamceller bestemmes af den integrerede regulatoriske effekt af et multikomponentsystem af vækstfaktorer og cytokiner, der produceres både af stamcellerne selv og af de cellulære elementer i deres matrix-stromale mikromiljø. Brugen af oprensede cellepopulationer og serumfri medier til celledyrkning gjorde det muligt at karakterisere vækstfaktorer, der har en stimulerende og hæmmende effekt på stamceller på forskellige niveauer, progenitorceller og celler, der er dedikeret i en eller anden lineær retning. Resultaterne af undersøgelserne indikerer overbevisende, at HSC'er opnået fra kilder med forskellige niveauer af ontogenetisk udvikling adskiller sig både fænotypisk og funktionelt. HSC'er i tidligere stadier af ontogenese er karakteriseret ved et højt selvreproduktionspotentiale og høj proliferativ aktivitet. Sådanne celler er kendetegnet ved længere telomerer og undergår dedikation til dannelse af alle hæmatopoietiske cellelinjer. Immunsystemets reaktion på HSC'er af embryonal oprindelse er forsinket, da sådanne celler udtrykker HLA-molekyler svagt. Der er en klar graduering af det relative indhold af HSC'er, deres selvfornyelseskapacitet og antallet af typer af commitment-linjer, de danner: CD34+ celler fra embryonal lever > CD34+ celler fra navlestrengsblod > CD34+ celler fra knoglemarv. Det er vigtigt, at sådanne forskelle ikke kun er forbundet med intra-, neo- og tidlige postanatale perioder af menneskelig udvikling, men også med hele ontogenesen - den proliferative og kolonidannende aktivitet af HSC'er opnået fra knoglemarv eller perifert blod fra en voksen er omvendt proportional med donorens alder.