13c urease-test: forberedelse, resultater, positiv, negativ

Siden opdagelsen af Helicobacter pylori-bakterien, der er forbundet med kronisk gastritis og mavesår og sår på tolvfingertarmen, er der blevet udviklet diagnostiske metoder, herunder ureasetesten, som gør det muligt at detektere disse mikroorganismer hos en specifik patient, bekræfte deres involvering i udviklingen af gastrointestinale sygdomme og ordinere effektiv behandling.

Ureaseenzym som biomarkør for Helicobacter-infektion

H. pylori-bakterier beskytter sig mod det sure miljø i mavesækkens lumen på to måder. For det første når mikroorganismerne slimhinden ved at beskadige den med deres flageller, helt ned til epitelcellerne, hvor pH-værdien er højere (dvs. surhedsgraden er lavere). For det andet neutraliserer bakterierne syren ved at syntetisere store mængder af det katalytisk aktive højmolekylære metalloenzym urease eller urea amidohydrolase.

Brugen af urease i diagnosen af Helicobacter er mulig ikke kun på grund af dette enzyms cytoplasmatiske aktivitet, men også på grund af ekstern interaktion med værtsceller.

Under ureases påvirkning nedbrydes mavesyre til hydrogennitrid (ammoniak) og kuldioxid (kuldioxid). Disse reagerer med saltsyre i mavesaften og danner en zone med neutral surhed omkring H. pylori, og understøtter også bakteriecellernes metabolisme.

Derfor er urease den vigtigste faktor i koloniseringen af H. pylori i den menneskelige maveslimhinde, og påvisning af ureolytisk aktivitet betragtes som en biomarkør for denne bakteries virulens, som gastroenterologer – ved at udføre en ureasetest – bruger til at diagnosticere Helicobacter-infektion samt til at overvåge resultaterne af lægemiddelinduceret destruktion (udryddelse) af bakterier.

H. pylori-diagnostik omfatter invasive og ikke-invasive tests – afhængigt af om endoskopisk undersøgelse af maven (fibrogastroduodenoskopi) er påkrævet eller ej. Den invasive test er den hurtige ureasetest eller den ekspres ureasetest (RUT-test), som kræver udtagning af vævsprøver (biopsi). 13C-urea-åndedrætstest (13C-UBT) er den mest almindelige ikke-invasive test.

Det skal bemærkes, at ikke-invasiv diagnostik af H. pylori kan udføres ved hjælp af en blodprøve for antistoffer (specificitet på 75 %, sensitivitet - 84 %), urin-ELISA (med en sensitivitet på 96 % og specificitet på 79 %) og et coprogram for bakterielle antigener. Yderligere information - Helicobacter pylori-infektion: antistoffer mod Helicobacter pylori i blodet

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikationer for proceduren urease-test

Kolonisering af maveslimhinden med H. pylori er i sig selv ikke en sygdom; det er en faktor i øget bakteriemængde på kroppen, som under visse betingelser kan udløse udviklingen af en række patologier i maven og den øvre mave-tarmkanal.

Indikationer for diagnostik af Helicobacter-infektion, især ureasetesten, er forbundet med gastritis med øget surhedsgrad, antral og atrofisk gastritis, duodenitis, mavesår og duodenalsår, gastrisk MALT-lymfom. Efter endoskopisk resektion af mavekræft i tidligt stadie kan en histologisk undersøgelse udføres i kombination med en hurtig ureasetest - FGDS med ureasetest.

Gastroenterologer kan ordinere en ureasetest, hvis patienter klager over en følelse af tyngde og ubehag i den epigastriske region, hyppig halsbrand efter at have spist, sur eller rådden bøvsen, bitterhed i munden, kvalme, tarmlidelser, ømme eller krampefulde smerter i maven.

[ 8 ], [ 9 ]

Forberedelse

Forberedelse til 13C-urea-åndedrættesten består i, at patienten stopper med at tage antibiotika 4 uger før testen, og NSAID'er, protonpumpehæmmere (som reducerer mavesyren) og syreneutraliserende midler eller adsorbenter, der anvendes mod halsbrand - mindst to uger før. Indtagelse af medicin bør stoppes fem til seks dage, og indtagelse af alkohol og rygning - tre dage før testen.

Det anbefales også at undgå at spise bælgfrugter i cirka en uge før testen, da bønner, ærter, linser, sojabønner og bønner indeholder urease (som beskytter planter mod sygdomme og insektskadedyr).

Aftenen før testen er en sen, tung middag kontraindiceret; på testdagen bør du udføre normal mundhygiejne, og halvanden time før testen bør du ikke drikke noget eller bruge tyggegummi.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Teknik urease-test

Implementeringsteknik:

• Først tages en grundlæggende vejrtrækningsprøve - en udånding laves i en blød plastikbeholder (og forsegles hermetisk);
• væske med tilsat 13C-urea indtages oralt;
• Efter 25-30 minutter tages en anden prøve af udåndet luft i en anden beholder.

De på denne måde opnåede prøver analyseres på et massespektrometer med separation af isotoper i en anden prøve og bestemmelse af deres koncentration. Forskellen mellem værdierne i den anden og første prøve udtrykkes som delta (δ) sammenlignet med basisniveauet. Normale værdier, dvs. negative værdier af det mærkede atom 13C hos uinficerede patienter, varierer fra 0,15-0,46%, og positive værdier i nærvær af infektion er 1,2-9,5% med en urinstofhydrolysehastighed på mere end 12-14 μg/min.

Kort sagt: påvisning af 13C-mærket kuldioxid i udåndet luft indikerer, at urinstof er blevet hydrolyseret af ureaseenzymet H. pylori, hvilket faktisk bekræfter dets tilstedeværelse i maven.

H. pylori-åndedrætstest

13C-UBT-testen eller 13C-urea-åndedrætstesten for Helicobacter pylori er en af de vigtigste ikke-invasive metoder til at detektere denne infektion: med 100 % sensitivitet og 98 % specificitet er risikoen for falsk positive og falsk negative resultater sammenlignet med histologi og blodantistoftest 2,3 % lavere.

Analysen er baseret på hydrolyse af oralt administreret flydende urinstof mærket med et kulstofatom (stabil ikke-radioaktiv isotop) 13C (50-75 mg 13C-urinstof fortyndet i 100 ml væske) ved hjælp af H. pylori urease.

Urea mærket med en isotopindikator undergår hydrolyse i maven med frigivelse af ammoniak og kuldioxid indeholdende mærkede atomer, som diffunderer ind i blodet og udskilles fra lungerne under vejrtrækning. Den mærkede kuldioxid registreres af en analytisk enhed - et massespektrometer, hvis funktion er baseret på ikke-dispersiv isotopselektiv spektroskopi, eller en infrarød spektroskopisk analysator.

Hurtig ureasetest

Rapid Urease Test (RUT) udføres under endoskopisk undersøgelse af mavesækken og tolvfingertarmen - ved hjælp af moderne endofibroskoper - og samtidig indsamling af biopsiprøver. Biomaterialet skal tages fra den antrale del af mavesækken. Derfor er fibrogastroduodenoskopi eller FGDS med ureasetest en invasiv diagnostisk metode.

Den opnåede biopsi nedsænkes fuldstændigt i et forberedt standardiseret medium indeholdende agargel, urinstof, syre-base-indikatoren phenolsulfophthalein og et bakteriostatisk middel (tilsat for at forhindre vækst af kontaminerende mikroorganismer og falsk positive resultater).

Hvis der er H. pylori-bakterier til stede i mavevævsprøven, vil den urease, de producerer, hydrolysere urinstof og hæve pH-værdien, hvilket er tydeligt synligt, da indikatoren skifter farve fra gul til orange (ved pH 6,8) og lilla (ved pH > 8). 75 % af positive tests skifter farve inden for 120-180 minutter, og jo hurtigere indikatoren skifter farve, desto større er antallet af bakterier. Men tests, der ser negative ud, gemmes i 24 timer.

Positiv hurtig ureasetest, hvad betyder det? En positiv RUT-test – indikatoren bliver rød – betyder, at biopsiprøven, der er placeret i agarmediet, indeholder mindst 105 H. pylori-bakterier, selvom deres koncentration normalt er højere.

Følsomheden af forskellige testmodifikationer varierer i området 90-98%, og specificiteten – 97-99%.

Som bemærket af gastroenterologer, hvis patientens konklusion indikerer en skarpt positiv ureasetest (tre krydser), betyder det: pH> 8, og indikatoren skiftede farve på mindre end 60 minutter fra det øjeblik, biopsien blev nedsænket, hvilket indikerer et stort antal H.pylori og et højt niveau af ureaseekspression. Det omtrentlige antal bakterier kan tælles under histologisk undersøgelse af biopsien under et mikroskop, og hvis det overstiger 40-50 i det visualiserede område, betragtes infektionsniveauet som højt.

13C-urea-åndedrætstesten giver sjældent falsk positive resultater, og hos patienter med mistanke om mavesår eller sår på tolvfingertarmen anses én positiv test for at bekræfte diagnosen, hvorimod et negativt resultat bør bekræftes ved EGD med urinstoftest.