Konfokal mikroskopi

Konfokalmikroskopi betragtes i øjeblikket som en af de mest lovende metoder til in vivo hudbilleddannelse, hvilket er grunden til, at interessen for den er usædvanligt stor blandt både klinikere og repræsentanter for forskningsinstitutioner.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokalmikroskopifunktioner

I dermatologi anvendes konfokal lasermikroskopi til:

• undersøgelse af forbindelsers penetration i huden (penetrationsveje, kinetik, fordeling i huden);
• observation af kirtlernes funktion (bestemmelse af aktiv og passiv tilstand);
• undersøgelser af mikrocirkulationssystemet (herunder i realtid);
• diagnostik af neoplasmer.

Uden at diskutere fordele og ulemper ved de ovennævnte typer konfokalmikroskopi, bemærker vi, at fluorescenslaser-konfokalmikroskopi i de senere år er blevet stadig mere populært.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalmikroskopi til hudundersøgelse

Det konfokale mikroskop giver to uvurderlige muligheder - studiet af væv på celleniveau i en tilstand af fysiologisk vital aktivitet og demonstrationen af studiets resultater (dvs. cellulær aktivitet) i fire dimensioner - højde, bredde, dybde og tid. For billedkvaliteten og studiets dybde spilles den vigtigste rolle af vævets evne til at transmittere lys, med andre ord dets gennemsigtighed. Konfokalmikroskopimetoden er kontaktløs, lysstrålen forårsager ingen skade eller ubehag for den patient, der undersøges, eller forsøgsdyret.

Konfokal scanning lasermikroskopi (CSLM) bruges til at undersøge huden. Metoden gør det muligt at se epidermis og papillærlaget i dermis med en opløsning tæt på histologisk. Alle undersøgelsesresultater vises på skærmen og gemmes som en pakke af billedfiler (som mikrofilm (i dynamik) eller mikrofotografier).

Der er to typer af metoden:

• reflekterende (reflektans CSLM) - baseret på det faktum, at forskellige intracellulære og intercellulære strukturer har forskellige brydningsindekser for lys, hvilket gør det muligt at opnå et kontrastbillede.
• fluorescens (fluorescens CSLM) - bruger laserlys, der trænger ind i huden og exciterer exo- eller endokromoforer i den, som som reaktion begynder at udsende fotoner (dvs. fluorescerer).

Lateral opløsning er den minimale afstand mellem punkter placeret på et vandret plan, dvs. et plan parallelt med hudoverfladen. Aksial opløsning er den minimale afstand mellem punkter placeret på et plan vinkelret på hudoverfladen.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Historien om konfokalmikroskopi

Ideen om at skabe et mikroskop, der er i stand til at vise et udsnit af levende væv på celleniveau, blev aktivt udviklet for 130 år siden. Hovedelementet i moderne mikroskoper blev designet i slutningen af det 19. århundrede og var en roterende skive med små huller arrangeret i en spiral. Denne skive blev opfundet i 1883 af den tyske studerende Paul Nipkow, efter hvem den blev opkaldt - Nipkow-skiven (eller Nipkow-disken). Opfindelsen var baseret på lysets evne, der passerer gennem små huller i skiven og en forstørrelseslinse, til at trænge dybt ind i vævet og belyse et cellefragment i en afstand fra overfladen. Når skiven roterer hurtigt, danner fragmenterne et enkelt billede. Ved at flytte strukturen væk fra eller tættere på objektet er det muligt at variere dybden af den optiske sektion af det væv, der studeres.

Det var først med fremkomsten af videooptagere i 1980'erne og computere, der kunne behandle billeder, i begyndelsen af 1990'erne, at det blev muligt at skabe og effektivt bruge de moderne mikroskoper, der bruges i dag.