Hepatitis A -virus

Viral hepatitis A er en menneskelig infektionssygdom, der er kendetegnet ved en overvejende leverskade og manifesteret klinisk forgiftning og gulsot. Hepatitis A-virus blev påvist i 1973 af S. Feinstone (og andre) ved at anvende metoden for immunelektronmikroskopi og ved at inficere aber - chimpanser og marmosetter. Essensen af metoden for immunelektronmikroskopi er, at specifikke antistoffer (serum af konvalescerende) tilsættes til filtratet af afføringen af patienten med hepatitis A, og bundfaldet underkastes elektronmikroskopi. På grund af interaktionen mellem vira og specifikke antistoffer undergår de specifik aggregering. I dette tilfælde er de nemmere at opdage, og aggregering under påvirkning af antistoffer bekræfter patogenens specificitet. Opdagelsen af S. Feinstone blev bekræftet i forsøg på frivillige.

Hepatitis A-virus har en sfærisk form, diameteren af virionen er 27 nm. Genomet er repræsenteret af et enkeltstrenget positivt RNA med en masse på 2,6 MD. Supercapsid er fraværende. Symmetri typen er kubisk - icosahedron. Capsidet har 32 capsomer, den er dannet af fire polypeptider (VP1-VP4). Ved dets egenskaber tilhører hepatitis A-viruset slægten Heparnovirus, familien Picornaviridae. Antigenisk er hepatitis A-virus (HAV-hepatitis A-virus) homogent. HAV multiplicerer godt i kroppen af chimpanser, bavianer, hamadryls og gambling aber (marmosets). I lang tid kunne virussen ikke dyrke. Kun i 1980'erne. Det var muligt at opnå cellekulturer, hvori HAV formerer sig. I første omgang blev transplanterede nyrelinjer af rhesusab-nyren (kultur FRhK-4) anvendt til disse formål og nu - den transplanterede linje af nyreceller fra grønne aber (kultur 4647).

Ifølge WHO's eksperters anbefalinger blev følgende nomenklatur for markører af hepatitis A-virus vedtaget: hepatitis A-virus-NAU-antistoffer mod hepatitis A-virus: anti-NAV-IgM og anti-NAV-IgG.

HAV er små partikler med en diameter på 27-30 nm, der har icosahedral symmetri og har homogenitet. På elektrondiffraktionsmønsteret opnået ved fremgangsmåden til immunaggregering detekteres elektron-tætte partikler med overfladisk placeret symmetrisk indrettede kapsomer. Med negativ kontrastering detekteres både komplette og tomme partikler i præparaterne. Nucleocapsid NAV, i modsætning til influenza, har ikke overfladefremspring og membraner. Det er også vigtigt, at virion HAV ikke har en hjerteformet struktur.

Ifølge sine fysisk-kemiske egenskaber for hepatitis A-virus er relateret til familien af Picornaviridae, slægten Enterovirus med atomnummer 72. Men denne taksonomi var for usædvanligt, og WHO fandt det muligt at forlade terminologien "hepatitis A-virus".

Ligesom alle virus i familien Picornaviridae indeholder hepatitis A-virus ribonukleinsyre. Nogle laboratorier har vist muligheden for at klone genomet af hepatitis A-viruset, hvilket giver mulighed for at opnå vaccinepræparater.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Modstandsdygtighed over for hepatitis A-virus

Virusen er relativt resistent over for høj temperatur, syrer, fedtopløsningsmidler (der er ingen lipider), desinfektionsmidler, det tolererer en lavtemperaturbrønd. Alt dette bidrager til dets langsigtede bevaring i det ydre miljø. Ved stuetemperatur overlever det i flere uger ved 60 ° C, taber delvist infektivitet efter 4-12 timer fuldstændigt - efter nogle minutter ved 85 ° C. Meget modstandsdygtig over for klor, som det kan trænge ind i vandhanen gennem barrierer for vandrensningsanlæg.

Sammenfatning af alle dataene, vi kan karakterisere hepatitis A-virus som følger:

• den naturlige mester er mand;
• forsøgsdyr - marmozet, chimpanse;
• kilde til infektion - afføring
• sygdom - epidemi og endemisk;
• transmissionsruten er fækal-oral;
• inkubationsperiode - 14-40 dage;
• overgang til kronisk hepatitis - ikke bemærket.

NAV-immunologiske egenskaber er som følger:

• Prototype stammer - Ms-1, CR-326, GVG. Alle er immunologisk ens eller identiske;
• Antistoffer - IgM og IgG produceres som reaktion på introduktionen af virusets strukturelle proteiner og er beskyttende;
• I Den trofiske virkning af humant serum y-globulin - beskytter eller dæmper sygdommen under indgiftstilstand før infektion eller under inkubationsperioden.

Fysisk-kemiske egenskaber ved NAU er som følger:

• Morfologi er en ikke-shell sfærisk partikel med kubisk symmetri, capsidet består af 32 capsomer;
• Diameteren er 27-30 nm;
• Tætheden i CsCl (g / cm3) er 1,38-1,46 (åbne partikler), 1,33-1,34 (modent virion), 1,29-1,31 (umodne virioner, tomme partikler);
• Sedimentationskoefficienten er 156-160 modne virioner;
• Nucleinsyre - enkeltstrenget, lineært RNA;
• Relativ molekylvægt - 2,25 106-2,8 106KD;
• Antallet af nukleotider er 6.500-8.100.

NAV's stabilitet i fysisk-kemiske virkninger er som følger:

• Chlorform, ether - er stabil;
• Klor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - delvis inaktivering;
• Chloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - fuldstændig inaktivering;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 timer - fuldstændig inaktivering, 1: 350, 20 ° С, 60 min - delvis inaktivering.

Temperatur:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С, 30 minutter - det er stabilt;
• 60 ° С, 12 timer - delvis inaktivering;
• 85 ° С, 1 min - fuld inaktivering;
• Autoklavering, 120 ° C. 20 minutter - fuldstændig inaktivering
• Tør varme, 180 ° C, 1 time - fuldstændig inaktivering;
• UV, 1,1 W, 1 min - fuldstændig inaktivering.

De præsenterede data viser, at de fysisk-kemiske egenskaber hos hepatitis A-virus er tættest på enterovirusser. Ligesom andre enteroviruser er HAV resistent over for mange desinfektionsopløsninger, fuldstændigt inaktiveret i flere minutter ved 85 ° C og autoklaveres.

Det er bevist, at hepatitis A-viruset kan reproduceres i primære og transplanterede monolagskulturlinjer af humane og abe celler. Specielt aktiv reproduktion af hepatitis A-virus i kulturer in vitro observeres, når man bruger leverekstrakter fra abe patienter som udgangsmateriale. Imidlertid bør det bemærkes, at i alle forsøg ifølge en reproduktion af hepatitis A virus i in vitro kulturer bemærkelsesværdigt lange inkubationstid i primære passager (-10 til 4 uger), efterfølgende ophobning af virale genetiske materiale stiger, men de absolutte værdier er meget ubetydelig, hvilket giver mange forskere anledning til at tale om ufuldstændig replikation af hepatitis A-virus i vævskulturer.

Sammenfatning af litteraturdata om reproduktion af hepatitis A-virus fra ikke-rotkulturer, det kan siges, at faktumet af en langvarig oplevelse af HAV in vitro er ubestridelig. Optimale betingelser for et stabilt højt niveau af viral replikation er ikke blevet identificeret, og dette begrænser undersøgelsen af dets biologiske egenskaber, fremstillingen af en kilde til reagenser til fremstilling af diagnostik og udformning af vacciner.

Samtidig kan mere optimistiske vurderinger af dette problem findes i litteraturen. Løsningen af alle problemer i forbindelse med dyrkning af hepatitis A-virus er et spørgsmål for den nærmeste fremtid. Når man studerer de optimale betingelser HAV opformering i cellekultur embryoniske nyre rhesusaber afsløret to faser: den fase af infektiøst virus produktion (op til 6-8 dage ved den 5. Passage) og fasen af intensiv akkumulering af viralt antigen. Det er også vist, at den væsentligste ophobning af virusantigenet forekommer under betingelserne for såkaldt rullekultur (roterende flasker). Denne måde åbner mulighed for at opnå en kultur af antigenet i store mængder, og som følge heraf vil udgangsmateriale til fremstilling af diagnostiske systemer og produktion af vaccinepræparater.

Epidemiologi af hepatitis A

Hepatitis A-virus har en høj patogenicitet for mennesker. Ifølge WHO's konklusion (1987) er sygdommens begyndelse tilstrækkelig til kun at inficere en virion. Den praktiske infektiøse dosis er dog sandsynligvis meget højere. Kilden til infektion er kun en inficeret person. Virusen frigives i store mængder med afføring 12-14 dage før udseendet af gulsot og inden for 3 uger. Icteric periode. Væsentlige forskelle i patogenes isolering hos patienter med icteric, gulsot og asymptomatiske former for hepatitis A er ikke blevet identificeret. Metoden til infektion er fækal-oral, hovedsagelig vandig, og også ved husholdnings- og fødevaruter. Metoden til infektion er fækal-oral, hovedsagelig vandig, og også ved husholdnings- og fødevaruter. Den primære (primære) overførselsvej for viruset er vand. Det er også muligt at luftbårne infektioner. Følsomheden af befolkningen er universel. For det meste er børn under 14 år syg. Sygdommen har en udtalt efterår-vinter sæsonbestemt.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptomer på hepatitis A

Inkubationsperioden varierer fra 15 til 50 dage, hvilket afhænger af mængden af den inficerede dosis af virussen, men i gennemsnit er 28-30 dage. En gang i kroppen, hepatitis A virus replikerer i de regionale lymfeknuder, i blodet og derefter til leverceller og forårsager diffus akut hepatitis, der er ledsaget af læsioner af leveren hepatocytter og reticuloendotheliale celler og et fald i dens afgiftning og barrierefunktioner. Skader på hepatocytter forekommer ikke på grund af virusets direkte virkning, men som følge af immunopatologiske mekanismer. Den mest typiske billede af hepatitis A er akut icteric cyklisk form: inkubationsperioden den prodromale (preicteric), gulsot og rekonvalescens periode. Men i foci af infektion afslører et stort antal patienter med asymptomatisk og anicteric former for infektion, hvis antal er vigtigere end icteric ( "isbjerg fænomen").

Post-infektiøs immunitet er stærk og langvarig, forårsaget af virale neutraliserende antistoffer og immunhukommelsesceller.

Mikrobiologisk diagnose af hepatitis A

Diagnose af hepatitis A (undtagen infektion dyr - chimpanser marmozet bavianer, som vi har) baseret på forskellige immunologiske fremgangsmåder: DGC immunfluorescensmetoden, hæmagglutinering immun adhæsion (kompleks af virusantigen + antistof i nærvær af komplement adsorberet på erythrocytter og forårsager deres adhæsion) . Dog anvendeligheden af disse metoder er begrænset på grund af manglen på specifikke virale antigener og immunofluorescens reaktion kræver leverbiopsier, hvilket er uønsket. Pålidelig og specifik metode er immun elektronmikroskopi, men det er meget tidskrævende. Derfor, indtil den eneste acceptable metode til immunologisk reaktion er immunosorbent assay fast fase i form af IPM, eller RIM, især i modifikationen af "capture" af immunglobulin M. I vores land til dette formål foreslåede testsystem - "DIAG-A-GEO". Arbejdsprincippet for dette testsystem er som følger. På væggene af polystyren lunochek sorberes første antistoffer mod immunoglobuliner af klassen M (antiimmunoglobuliny M) tilsættes derefter til den undersøgte patientserum. Hvis der er antistofklasse IgM, vil de binde til et antistof-Ti-M, tilsættes derefter til en særlig viralt antigen (hepatitis A-virus), som opnås ved dyrkning i cellekultur. Systemet skylles, og dertil sættes antivirale antistoffer mærket med peberrodsperoxidase. Hvis alle fire komponenter i systemet interagerer, opstår der en firelags "sandwich":

• antiimmunoglobuliner M,
• immunglobuliner M (mod hepatitis A-virus - i patientens testserum)
• viralt antigen,
• antivirale antistoffer mærket med et enzym.

For at detektere dette kompleks, tilsættes et substrat for enzymet til lunetterne. Under enzymets indflydelse ødelægges det, og et farvet produkt dannes. Farvens intensitet kan måles kvantitativt med et spektrofotometer eller photocolorimeter.

Fordelen med metoden til "capture" af IgM er, at antistoffer fra denne klasse af immunoglobuliner forekommer ved det primære immunrespons og angiver et aktivt infektionsstadium, de forsvinder efter den overførte sygdom. Antivirale antistoffer, der tilhører klassen IgG, derimod vedvarer i lang tid efter sygdommen, hvilket giver den tilkøbte immunitet. Til påvisning af hepatitis A-virus foreslås en DNA-probemetode: en komplementær vRNA-probe anvendes som en probe.

Behandling af hepatitis A

På grund af det faktum, at interferonproduktionen er forstyrret i viral hepatitis, er behandlingen af hepatitis A baseret på brugen af interferon og inducer af dets endogene syntese amixin.

Specifik forebyggelse af hepatitis A

Tidligere almindeligt anvendt seroprevention hepatitis A under anvendelse gammaglobulin var ikke berettiget imidlertid lagt vægt på bedriften immunisering udført vaccination mod hepatitis A. Til dette formål udvikles forskellige varianter af vacciner og anvendes allerede. I Rusland blev der opnået en effektiv vaccine mod hepatitis A i 1995, og nu er den blevet anvendt succesfuldt.