Hepatitis A-virus

Viral hepatitis A er en infektionssygdom hos mennesker, primært karakteriseret ved leverskade og klinisk manifesteret ved forgiftning og gulsot. Hepatitis A-virus blev opdaget i 1973 af S. Feinstone (et al.) ved hjælp af immunelektronmikroskopi og ved infektion af aber - chimpanser og silkeaber. Essensen af immunelektronmikroskopimetoden er, at specifikke antistoffer (rekonvalescerende serum) tilsættes filtratet af afføring fra en patient med hepatitis A, og sedimentet underkastes elektronmikroskopi. På grund af virussernes interaktion med specifikke antistoffer gennemgår de specifik aggregering. I dette tilfælde er de lettere at detektere, og aggregering under påvirkning af antistoffer bekræfter patogenets specificitet. S. Feinstones opdagelse blev bekræftet i eksperimenter på frivillige.

Hepatitis A-virus er sfærisk, viriondiameteren er 27 nm. Genomet er repræsenteret af enkeltstrenget positivt RNA med mm 2,6 MD. Der er ingen superkapsid. Symmetritypen er kubisk - ikosaeder. Kapsidet har 32 kapsomerer, det er dannet af fire polypeptider (VP1-VP4). Ifølge dets egenskaber tilhører hepatitis A-virus slægten Heparnovirus, familien Picornaviridae. Med hensyn til antigener er hepatitis A-virus (HAV - hepatitis A-virus) homogen. HAV formerer sig godt i kroppen af chimpanser, bavianer, hamadryasbavianer og silkeaber. I lang tid kunne virussen ikke dyrkes. Først i 1980'erne var det muligt at opnå cellekulturer, hvor HAV formerer sig. I starten blev der anvendt kontinuerlige cellelinjer af rhesusmakakeembryo-nyre (kultur FRhK-4) til disse formål, og nu anvendes en kontinuerlig cellelinje af grønne abenyreceller (kultur 4647).

Ifølge anbefalinger fra WHO-eksperter er følgende nomenklatur for hepatitis A-virusmarkører blevet vedtaget: hepatitis A-virus - HAV-antistoffer mod hepatitis A-virus: anti-HAV IgM og anti-HAV IgG.

HAV er en lille partikel med en diameter på 27-30 nm, der har ikosaedrisk symmetri og besidder homogenitet. Elektronogrammet opnået ved hjælp af immunaggregeringsmetoden afslører elektrontætte partikler med overfladisk placerede symmetrisk arrangerede capsomerer. Ved negativ kontrast afsløres både fulde og tomme partikler i præparaterne. Nukleokapsidet af HAV har, i modsætning til influenza, ikke overfladefremspring og en membran. Det er også vigtigt, at HAV-virionet ikke har en hjerteformet struktur.

Baseret på dens fysisk-kemiske egenskaber klassificeres hepatitis A-virus som tilhørende picornavirusfamilien, enterovirusslægten med serienummer 72. Denne taksonomi viste sig imidlertid at være for usædvanlig, og WHO mente, at det var muligt at bevare terminologien "hepatitis A-virus".

Ligesom alle vira i Picornaviridae-familien indeholder hepatitis A-virus ribonukleinsyre. Nogle laboratorier har vist muligheden for at klone hepatitis A-virusgenomet, hvilket åbner op for muligheden for at fremstille vacciner.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Resistens mod hepatitis A-virus

Virussen er relativt resistent over for høje temperaturer, syrer, fedtopløsningsmidler (ingen lipider), desinfektionsmidler og tolererer lave temperaturer godt. Alt dette bidrager til dens langsigtede bevarelse i det ydre miljø. Ved stuetemperatur overlever den i flere uger, ved 60 °C mister den delvist sin smitsomhed efter 4-12 timer og helt efter flere minutter ved 85 °C. Den er meget resistent over for klor, hvilket gør den i stand til at trænge ind i postevand gennem barrierer i vandbehandlingsanlæg.

Når vi opsummerer alle dataene, kan vi karakterisere hepatitis A-virussen som følger:

• den naturlige vært er mennesket;
• forsøgsdyr - silkeaber, chimpanser;
• kilden til infektion er afføring;
• sygdommen er epidemisk og endemisk;
• smittevej: fæko-oral;
• inkubationsperiode - 14-40 dage;
• overgang til kronisk hepatitis - ikke observeret.

De immunologiske egenskaber ved HAV er som følger:

• Prototypiske stammer - Ms-1, CR-326, GВG. Alle er immunologisk ens eller identiske;
• Antistoffer - IgM og IgG, produceres som reaktion på introduktionen af virussens strukturelle proteiner og er beskyttende;
• I. Den beskyttende virkning af humant serum gammaglobulin - forebygger eller dæmper sygdommen, hvis det administreres før infektion eller i inkubationsperioden.

De fysisk-kemiske egenskaber ved NAU er som følger:

• Morfologi: skalfri sfærisk partikel med kubisk symmetri, kapsidet består af 32 kapsomerer;
• Diameter - 27-30 nm;
• Densitet i CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (åbne partikler), 1,33-1,34 (modent virion), 1,29-1,31 (umodne virioner, tomme partikler);
• Sedimentationskoefficient - 156-160 modne virioner;
• Nukleinsyre er et enkeltstrenget, lineært RNA;
• Relativ molekylvægt - 2,25 10⁶-2,8 10⁶KD;
• Antallet af nukleotider er 6.500-8.100.

HAV's stabilitet under fysiske og kemiske påvirkninger er som følger:

• Kloroform, ether - stabil;
• Klor, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 min - delvis inaktivering;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 min - fuldstændig inaktivering;
• Formalin, 1:4000, 35-37 °C, 72 timer - fuldstændig inaktivering, 1:350, 20 °C, 60 min - delvis inaktivering.

Temperatur:

• 20-70 °C - stabil;
• 56 °C, 30 min - stabil;
• 60 °C, 12 timer - delvis inaktivering;
• 85 °C, 1 min - fuldstændig inaktivering;
• Autoklavering, 120 °C. 20 min - fuldstændig inaktivering;
• Tør varme, 180 °C, 1 time - fuldstændig inaktivering;
• UFO, 1,1 W, 1 min - fuldstændig inaktivering.

De præsenterede data viser, at hepatitis A-virus med hensyn til sine fysisk-kemiske egenskaber er tættest på enterovira. Ligesom andre enterovira er HAV resistent over for mange desinfektionsopløsninger og inaktiveres fuldstændigt inden for få minutter ved 85 °C og autoklavering.

Det er blevet bevist, at hepatitis A-virus kan formere sig i primære og kontinuerlige monolagslinjer af humane og abecellekulturer. Særligt aktiv reproduktion af hepatitis A-virus i in vitro-kulturer observeres, når leverekstrakter fra syge aber anvendes som udgangsmateriale. Det skal dog bemærkes, at i alle forsøg med reproduktion af hepatitis A-virus på in vitro-kulturer henledes opmærksomheden på den lange inkubationsperiode under primære passager (op til 4-10 uger), hvorefter akkumuleringen af viralt genetisk materiale øges, men de absolutte værdier forbliver meget ubetydelige, hvilket giver mange forskere grund til at tale om ufuldstændig replikation af hepatitis A-virus i vævskulturer.

Når man opsummerer litteraturdata om reproduktion af hepatitis A-virus i ekstravævskulturer, kan det siges, at den langvarige overlevelse af HAV in vitro er uden tvivl. Optimale betingelser for et stabilt højt niveau af virusreplikation er ikke endeligt identificeret, og dette hindrer studiet af dets biologiske egenskaber og opnåelse af en kilde til reagenser til fremstilling af diagnostik og vaccinedesign.

Samtidig kan mere optimistiske vurderinger af dette problem findes i litteraturen. Løsningen på alle problemer relateret til dyrkning af hepatitis A-virus er et spørgsmål om den nærmeste fremtid. Ved undersøgelsen af de optimale betingelser for reproduktion af HAV i kulturen af embryonale nyreceller fra rhesusmakaken blev der identificeret to faser: fasen med produktion af den infektiøse virus (op til 6-8 dage på niveau med den 5. passage) og fasen med intensiv akkumulering af det virale antigen. Det blev også vist, at den mest betydelige akkumulering af det virale antigen sker under betingelserne for den såkaldte rulledyrkning (roterende kolber). Denne metode åbner op for store muligheder for at opnå kulturelt antigen i store mængder, og følgelig vil kildematerialet til fremstilling af diagnostiske systemer og fremstilling af vacciner fremkomme.

Epidemiologi af hepatitis A

Hepatitis A-virus er meget patogen for mennesker. Ifølge WHO (1987) er infektion med blot ét virion nok til at forårsage sygdommen. Den praktiske smittedosis er dog sandsynligvis meget højere. Den eneste smittekilde er en inficeret person. Virusset udskilles i store mængder med afføring 12-14 dage før gulsot og i løbet af de 3 uger af den ikteriske periode. Der er ikke fundet signifikante forskelle i udskillelsen af patogenet hos patienter med ikteriske, anikteriske og asymptomatiske former for hepatitis A. Smittevejen er fækal-oral, hovedsageligt vandbåren, samt husholdnings- og fødevarebåren. Smittevejen er fækal-oral, hovedsageligt vandbåren, samt husholdnings- og fødevarebåren. Den primære (primære) smittevej for virusset er vandbåren. Smitte via luftbårne dråber er også mulig. Befolkningens modtagelighed er universel. For det meste er børn under 14 år berørt. Sygdommen har en udtalt efterårs-vinter sæsonbestemthed.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Symptomer på hepatitis A

Inkubationsperioden varierer fra 15 til 50 dage, afhængigt af virussens infektiøse dosis, men er i gennemsnit 28-30 dage. Når hepatitis A-virus er i kroppen, formerer den sig i de regionale lymfeknuder, trænger ind i blodet og derefter i levercellerne og forårsager akut diffus hepatitis, som ledsages af skade på hepatocytter og retikuloendoteliale elementer i leveren samt et fald i dens afgiftnings- og barrierefunktioner. Skader på hepatocytter opstår ikke på grund af virussens direkte virkning, men som et resultat af immunopatologiske mekanismer. Det mest typiske billede af hepatitis A er en akut ikterisk cyklisk form: inkubationsperiode, prodromal (præikterisk), ikterisk periode og rekonvalescens. Imidlertid opdages et stort antal patienter med anikteriske og asymptomatiske infektionsformer i infektionscentrene, hvis antal er betydeligt mere end ikteriske ("isbjergfænomen").

Immunitet efter infektion er stærk og langvarig og forårsaget af virusneutraliserende antistoffer og immunhukommelsesceller.

Mikrobiologisk diagnostik af hepatitis A

Diagnostik af hepatitis A (med undtagelse af infektion hos dyr - chimpanser, silkeaber, bavianer, som vi ikke har) er baseret på forskellige immunologiske metoder: RSC, immunofluorescensmetode, hæmagglutination af immunadhæsion (komplekset af viralt antigen + antistof i nærvær af komplement adsorberes på erytrocytter og forårsager deres adhæsion). Mulighederne for at anvende disse metoder er dog begrænsede på grund af manglen på specifikke virale antigener, og immunofluorescensreaktionen kræver leverbiopsi, hvilket er uønsket. Metoden med immunelektronmikroskopi er pålidelig og specifik, men den er meget arbejdskrævende. Derfor er den eneste acceptable immunologiske reaktion indtil videre metoden med immunosorbentanalyse af den faste fase i form af IFM eller RIM, især ved modifikation af "indfangning" af immunoglobuliner af klasse M. I vores land er et testsystem blevet foreslået til dette formål - "DIAGN-A-HEP". Princippet for dette testsystems funktion er som følger. Først sorberes antistoffer mod immunoglobuliner af klasse M (antiimmunoglobuliner M) på væggene i polystyrenbrønde, derefter tilsættes patientens serum, der skal testes. Hvis det indeholder IgM-antistoffer, binder de sig til anti-antistoffer af klasse M, hvorefter et specifikt viralt antigen (hepatitis A-virus) tilsættes, som opnås ved dyrkning i cellekultur. Systemet vaskes, og antivirale antistoffer mærket med peberrodsperoxidase tilsættes det. Hvis alle fire komponenter i systemet interagerer, dannes en firelags "sandwich":

• antiimmunoglobuliner M,
• immunoglobuliner M (mod hepatitis A-virus - i patientens serum under undersøgelsen),
• viralt antigen,
• enzymmærkede antivirale antistoffer.

For at detektere dette kompleks tilsættes et substrat for enzymet til brøndene. Under enzymets påvirkning ødelægges det, og der dannes et farvet produkt. Farvens intensitet kan måles kvantitativt ved hjælp af et spektrofotometer eller fotokolorimeter.

Fordelen ved IgM-"indfangningsmetoden" er, at antistoffer fra denne klasse af immunglobuliner optræder under det primære immunrespons og indikerer det aktive infektionsstadium. De forsvinder, efter at sygdommen er opstået. Antivirale antistoffer, der tilhører IgG-klassen, derimod vedvarer i lang tid efter, at sygdommen er opstået, hvilket giver erhvervet immunitet. En DNA-probemetode er blevet foreslået til at detektere hepatitis A-virus: komplementær vRNA-DNA anvendes som probe.

Behandling af hepatitis A

Da interferonproduktionen forstyrres ved viral hepatitis, er behandlingen af hepatitis A baseret på brugen af interferon og amixin, der inducerer dens endogene syntese.

Specifik forebyggelse af hepatitis A

Tidligere udbredt anvendt seroprofylakse mod hepatitis A med gammaglobulin retfærdiggjorde sig ikke, derfor blev hovedvægten lagt på at udføre vaccinationsprofylakse, og vaccination mod hepatitis A udføres. Til dette formål er forskellige typer vacciner under udvikling og i brug. I Rusland blev en effektiv vaccine mod hepatitis A opnået tilbage i 1995, og den anvendes nu med succes.