Karyotypebestemmelse

Til undersøgelse af kromosomer anvendes kortvarige blodkulturer ofte, såvel som knoglemarvsceller og fibroblastkulturer. Blodet leveret til laboratoriet med antikoagulant underkastes centrifugering til udfældning af røde blodlegemer, og leukocytter inkuberes i dyrkningsmediet i 2-3 dage. Phytohemagglutinin tilsættes til blodprøven, da det accelererer agglutination af erythrocytter og stimulerer opdelingen af lymfocytter. Den mest egnede fase til undersøgelsen af kromosomer er mitos metafase, så colchicin anvendes til at standse opdelingen af lymfocytter på dette stadium. Tilføjelse af dette lægemiddel til kulturen fører til en forøgelse af andelen af celler, der er i metafase, det vil sige på scenen af cellecyklussen, når kromosomerne ses bedst. Hver kromosom replikerer (producerer sin egen kopi), og efter passende farvning er synlig i form af to kromatider fastgjort til centromeren eller den centrale indsnævring. Cellerne behandles derefter med en hypotonisk natriumchloridopløsning, fast og farvet.

Til farvning af kromosomer anvendes Romanovsky-Giemsa-farvestoffet, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin hyppigere. De pletter helt og holdent kromosomer, ensartet (rutinemetoden) og kan bruges til at identificere numeriske anomalier af menneskelige kromosomer.

For at opnå et detaljeret billede af strukturen af kromosomer, identifikation (bestemmelse) af individuelle kromosomer eller deres segmenter anvendes forskellige metoder til differentiel farvning. De mest anvendte metoder er Giemsa, såvel som G- og Q-bøjning. En mikroskopisk undersøgelse af lægemidlet langs længden af kromosomet afslører en række farvede (heterochromatin) og umalet (euchromatin) bånd. Karakteren af den tværgående striation opnået i dette tilfælde gør det muligt at identificere hvert kromosom i sættet, idet strimlerne og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

Metafaseplader af individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer skæres fra fotografierne og indsættes på papirarket i rækkefølge; Et sådant billede af kromosomer kaldes en karyotype.

Anvendelsen af yderligere farvning såvel som nye metoder til opnåelse af kromosompræparater, som tillader at strække kromosomerne i længden, øger signifikansen af cytogenetisk diagnostik signifikant.

Der er udviklet en særlig nomenklatur for at beskrive den menneskelige karyotype. Den normale karyotype af en mand og en kvinde er udpeget som henholdsvis 46, XY og 46, XX. Når Downs syndrom karakteriseret ved tilstedeværelsen af et ekstra kromosom 21 (trisomi 21), en kvinde beskrives som en karyotype 47, XX 21+ og mænd - 47, XY, 21+. I tilstedeværelsen af en strukturel anomali af kromosomet er det nødvendigt at angive en ændret lang eller kort arm: bogstavet p angiver en kort arm, q en lang arm og en translokation. Når den korte arm af kromosom 5 ("cat-scream" syndromet) er slettet, beskrives den kvindelige karyotype som 46, XX, 5p-. Moderen til et barn med translokations Down syndrom - en bærer med en afbalanceret translokation på 14/21 har en karyotype på 45, XX, t (14q, 21q). Translokationskromosomet dannes, når de lange arme i kromosom 14 og 21 fletter sammen, korte skuldre går tabt.

Hver skulder er opdelt i distrikter, og de til gengæld - ind i segmenter, og de og andre er udpeget af arabiske tal. Kromosomens centromere er udgangspunktet for tælling af regioner og segmenter.

Således anvendes fire markører til kromatos topografi: kromosom nummer, skulder symbol, distriktsnummer og segmentnummer inden for den givne region. For eksempel betyder posten 6p21.3, at det er et kromosom af det 6. Par, dets korte arm, region 21, segment 3. Der er yderligere symboler, især pter - enden af den korte arm, qter - slutningen af den lange arm.

Den cytogenetiske forskningsmetode gør det muligt at opdage deletioner og andre ændringer i kromosomer alene i størrelsen af ca. 1 million baser (nukleotider).

[1], [2], [3], [4]