A-vitamin i blodet

Referenceværdier (normer) for koncentrationen af vitamin A (retinol) i blodserum: hos børn i alderen 1-6 år - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 år - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 år - 0,91-2,51 μmol/l; hos voksne - 1,05-2,09 μmol/l.

A-vitamin er et fedtopløseligt vitamin og findes i to former: A-vitamin i sig selv eller retinol (findes kun i animalske produkter), og provitamin A, kendt som caroten (udvindes fra animalske og plantebaserede produkter), som kan omdannes til retinol i fordøjelseskanalens vægge. Cirka 50-90% af retinol fra kosten absorberes i tyndtarmen og transporteres i et chylomikronbundet kompleks til leveren, hvor det lagres som retinolpalmitat. Når det er nødvendigt, frigives det til blodbanen som retinol kompleksbundet med vitamin A-bindende protein. I blodserumet binder vitamin A-bindende protein + retinolkomplekset sig til transthyretin. Fra blodserumet optages retinol af målceller, såsom fotoreceptorerne i nethinden og epitelet.

Når kroppen modtager A-vitamin i mængder, der overstiger behovet (180-430 mcg retinol pr. dag afhængigt af alder, køn og fysiologisk tilstand), aflejres overskuddet i leveren, hvorved der dannes et depot af dette vitamin. Når indtaget af retinol med mad reduceres, frigives dets reserver fra leveren til blodbanen, hvilket opretholder koncentrationen af retinol i blodserum på et normalt niveau (over 0,7 μmol/l). Andre biologisk aktive former for A-vitamin (retinol og retinsyre) findes i blodet i meget lave koncentrationer (under 0,35 μmol/l); retinolestere tegner sig for cirka 5% af det samlede A-vitamin (0,1-0,17 μmol/l).

A-vitamin spiller en vigtig rolle i oxidations-reduktionsprocesser. Retinol fremmer dannelsen af glykogen i leveren og musklerne, hjælper med at øge kolesterolindholdet i blodet og deltager i syntesen af steroid- og kønshormoner. Det er nødvendigt for vækst og dannelse af skeletsystemet, rhodopsin-resyntese og fremmer også den normale funktion af slimhinderne og hudens integumentære epitel, hvilket forhindrer dens metaplasi, hyperkeratose og overdreven afskalling. A-vitamin hjælper med at styrke hår, tænder og tandkød. I de senere år er A-vitamins alsidige rolle i forebyggelse af kræft og regulering af immunitet blevet vist (det er nødvendigt for fuldførelse af fagocytose, øger Ig-syntesen, stimulerer dannelsen af T-dræbere, stimulerer type II T-hjælpere osv.). A-vitamin er en aktiv antioxidant, der primært virker i nærvær af E-vitamin; det beskytter C-vitamin mod oxidation. A-vitaminmangel betragtes som en risikofaktor for maligne neoplasmer. Eksperimentelle undersøgelser har vist, at en forøgelse af indholdet af A-vitamin i kosten øger den gennemsnitlige levealder med 17,5%. Zink er en essentiel kofaktor i metabolismen af A-vitamin (nødvendig for syntesen af A-vitaminbindende protein).

Det gennemsnitlige daglige behov for retinol for voksne (20-50 år) er 1,2 mg (4000 IE, 1 IE svarer til 0,3 mcg retinol), for gravide kvinder - 1,5 mg (5000 IE), for ammende kvinder - 1,8 mg (6000 IE), for personer over 60 år - 2,5 mg (10.000 IE). Mindst en tredjedel af det daglige behov for retinol bør tilføres kroppen i færdig form; resten kan dækkes ved at indtage carotenoider, hvorfra retinol dannes i kroppen. Det skal tages i betragtning, at cirka 30% af retinol i fødevarer ødelægges under varmebehandling. Retinols aktivitet er 2 gange højere end carotens, og desuden absorberes kun 30-40% af sidstnævnte i tarmen. Derfor menes det, når man vurderer kosten, at 1 mg retinol omtrent svarer til 6 mg carotenoider.

Bestemmelse af retinol (vitamin A) og carotenoider i blodserum ifølge Bessey som modificeret af LA Anisimova

Metodens princip

Bestemmelsen af vitamin A og carotenoider er baseret på deres hydrolyse i en alkalisk alkoholopløsning efterfulgt af ekstraktion med en blanding af organiske opløsningsmidler.

Reagenser

• 11 M kaliumhydroxid (KOH) opløsning.
• 96% ethylalkohol.
• 1 M kaliumhydroxid (KOH) opløsning i 96% ethylalkohol: 1 volumen 11 M KOH opløsning blandes med 10 volumener 96% ethylalkohol. Reagenset fremstilles på undersøgelsesdagen. Hvis der opstår farvning under blanding, skal alkoholen renses ved destillation før brug.
• Xylen, kemisk ren
• Oktan, kemisk ren
• Xylen-oktan-blanding: fremstillet ved at blande lige store mængder xylen og oktan.

Undersøgelserne udføres ved hjælp af et spektrofotometer.

Processen til bestemmelse af vitamin A

Blod taget fra fingeren (ca. 1 ml) placeres i et centrifugerør og placeres i en glaskop med varmt vand (temperatur 40-45° C) i 20-30 minutter. For at separere serummet trækkes blodproppen forsigtigt rundt langs kanten af rørets vægge med en tynd glasstav og centrifugeres ved 3000 o/min i 10 minutter.

0,12 ml serum opsamles og overføres til et agglutinationsrør, hvortil 0,12 ml 1 M kaliumhydroxid-alkoholopløsning derefter tilsættes. Indholdet rystes grundigt.

Reagensglas med prøver placeres i et vandbad i 20 minutter ved en temperatur på 60 °C for at udføre hydrolyse.

Prøverne afkøles, og der tilsættes 0,12 ml xylen-oktan-blanding, og de rystes kraftigt i 10-15 sekunder. De afkøles igen og centrifugeres.

Det øverste lag indeholdende A-vitamin og carotenoider fjernes forsigtigt med en Pasteur-pipette med en gummibold og overføres til mikrokuvetter.

Prøverne spektrofotometres ved en bølgelængde på 328 nm for at bestemme vitamin A og ved en bølgelængde på 460 nm for at bestemme carotenoider.

Efter spektrofotometri udsættes prøverne for ultraviolet stråling for at ødelægge vitamin A. Til dette formål installeres en kvartslampe (bakteriedræbende lampe) i en afstand af 15-20 cm fra mikrokuvetterne, således at den del af kuvetten, der er fyldt med væske, udsættes for strålingen; bestrålingstiden er 45-60 min.

Prøverne respektrofotometres ved en bølgelængde på 328 nm. Vitamin A-indholdet bestemmes af forskellen i ekstinktionsværdier (optisk densitet) under hensyntagen til koefficienten (faktoren) 637 beregnet af Bessey for vitamin A.

Beregningen udføres i henhold til formlen:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Hvor X er indholdet af vitamin A, μg/dl; 637 er den koefficient, der beregnes af Bessey til bestemmelse af vitamin A; E328(1) er opløsningens optiske densitet før bestråling; E328(2) er opløsningens optiske densitet efter bestråling.

Koefficienten for omregning af vitamin A-koncentrationen fra µg/dL til µmol/L er 0,035.

Indholdet af carotenoider beregnes ved hjælp af formlen:

X = 480-E480,

Hvor X er carotenoidindholdet, μg/dl; 480 er den koefficient, der beregnes af Bessey til bestemmelse af carotenoider; E480 er testopløsningens optiske densitet.

Note

Ifølge Bessey kan man bruge et større eller mindre volumen serum, når man udfører forskning, men dets forhold til volumenet af alkoholopløsningen skal være konstant med enhver ændring i volumenet (mængden) af xylen-oktan-blandingen.

Det normale indhold af A-vitamin i blodserum er: hos nyfødte og spædbørn - 160-270 μg/l; hos voksne - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Indholdet af carotenoider i blodserum hos voksne er 800-2300 μg/l.