Medicinsk ekspert af artiklen
Nye publikationer
PCR som metode til diagnosticering af genetiske sygdomme
Sidst revideret: 04.07.2025
Alt iLive-indhold gennemgås medie eller kontrolleres for at sikre så meget faktuel nøjagtighed som muligt.
Vi har strenge sourcing retningslinjer og kun link til velrenommerede medie websteder, akademiske forskningsinstitutioner og, når det er muligt, medicinsk peer reviewed undersøgelser. Bemærk at tallene inden for parentes ([1], [2] osv.) Er klikbare links til disse undersøgelser.
Hvis du mener, at noget af vores indhold er unøjagtigt, forældet eller på anden måde tvivlsomt, skal du vælge det og trykke på Ctrl + Enter.
PCR er en ny landvinding inden for molekylær genetik, der anvendes til DNA-amplifikation og muliggør hurtig in vitro- multiplikation af en specifik DNA-region (dvs. et hvilket som helst gen af interesse) mere end 200.000 gange. For at udføre reaktionen er det tilstrækkeligt at have DNA-materiale fra én celle; mængden af DNA amplificeret ved PCR er så stor, at dette DNA blot kan farves (brug af radioaktive prober efter elektroforese er ikke påkrævet). En forudsætning for at udføre PCR er kendskab til nukleotidsekvensen af den amplificerede DNA-region for korrekt udvælgelse af kunstigt syntetiserede primere.
I øjeblikket er PCR en enkeltrørsproces, der består af gentagne amplifikationscyklusser (reproduktion, kopiering) af en specifik DNA-molekylesekvens for at opnå et tilstrækkeligt stort antal kopier, der kan identificeres ved elektroforese. En af nøglekomponenterne i reaktionen er "primere" - syntetiske oligonukleotider bestående af 20-30 baser, der er komplementære til "stederne" (områderne) for annealing (vedhæftning) på det identificerede område af matrix-DNA'et.
PCR foregår automatisk i en programmerbar termostat - en termisk cykler (forstærker). Den tretrinscyklus, som resulterer i nøjagtige kopier af den identificerede sektion af matrix-DNA, gentages 30-50 gange i overensstemmelse med det specificerede termiske cyklerprogram. I den første cyklus hybridiserer oligoprimere med det originale matrix-DNA og derefter (i efterfølgende cyklusser) med nyligt syntetiserede DNA-molekyler, efterhånden som de akkumuleres i reaktionsblandingen. I sidstnævnte tilfælde afsluttes DNA-syntesen ikke som følge af en temperaturændring, men når DNA-polymerasegrænsen for den amplificerede sektion nås, hvilket bestemmer størrelsen af den nyligt syntetiserede DNA-sektion med en nøjagtighed på ét nukleotid.
Elektroforese anvendes som en metode til at detektere de opnåede DNA-molekyler, hvorved det amplificerede materiale separeres i henhold til størrelsen af amplikonerne (amplifikationsprodukterne).
PCR kan bruges til direkte at undersøge placeringen af mistænkte mutationer eller polymorfe steder, samt til at studere tilstedeværelsen af andre specifikke DNA-funktioner.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]