PCR som en metode til diagnosticering af genetiske sygdomme
Sidst revideret: 11.04.2020
Alt iLive-indhold gennemgås medie eller kontrolleres for at sikre så meget faktuel nøjagtighed som muligt.
Vi har strenge sourcing retningslinjer og kun link til velrenommerede medie websteder, akademiske forskningsinstitutioner og, når det er muligt, medicinsk peer reviewed undersøgelser. Bemærk at tallene inden for parentes ([1], [2] osv.) Er klikbare links til disse undersøgelser.
Hvis du mener, at noget af vores indhold er unøjagtigt, forældet eller på anden måde tvivlsomt, skal du vælge det og trykke på Ctrl + Enter.
PCR er en ny præstation i molekylær genetik, der anvendes til DNA-amplifikation og tillader, at den specifikke del af DNA (det vil sige et hvilket som helst gen af interesse) hurtigt replikeres in vitro mere end 200.000 gange. For at udføre reaktionen er det tilstrækkeligt at have DNA-materialet i en celle; mængden af DNA amplificeret ved PCR er så stor, at dette DNA simpelthen kan farves (ved anvendelse af radioaktive prober efter elektroforese er ikke påkrævet). En forudsætning for at udføre PCR er kendskabet til nukleotidsekvensen af den amplificerede DNA-region for korrekt udvælgelse af kunstigt syntetiserede primere.
Øjeblikket er PCR en proces, der forekommer i et enkelt rør, og som består af gentagne cyklusser af amplifikation (reproduktion, kopiere) af specifikke DNA-sekvenser for at opnå et tilstrækkeligt stort antal kopier, der kan identificeres ved elektroforese. Et centralt element i reaktionen - "primere" - syntetiske oligonukleotider, som bestod af 20-30 baser af komplementære "steder" (områder) annealing (forbindelse) til identificerbar del af template-DNA'et.
PCR udføres automatisk i en programmerbar termostat - termocykler (termocykler). Tre-trinscyklusen, som et resultat af hvilken de nøjagtige kopier af den identificerbare del af template-DNA'et opnås, gentages 30-50 gange i overensstemmelse med det forudindstillede program for termocykleren. I den første cyklus hybridiserer oligopramerne med det originale skabelon-DNA og derefter (i efterfølgende cykler) og med de nyligt syntetiserede DNA-molekyler, som de akkumulerer i reaktionsblandingen. I sidstnævnte tilfælde slutter syntesen af DNA ikke på grund af en ændring i temperaturregimet, men når man når DNA-polymerasegrænsen for det amplificerede område, som bestemmer størrelsen af det nyligt syntetiserede DNA-område inden for et nukleotid.
Som en metode til detektion af de opnåede DNA-molekyler anvendes elektroforese, ved hjælp af hvilket det amplificerede materiale er opdelt i overensstemmelse med ampliconernes størrelse (amplifikationsprodukter).
Ved hjælp af PCR er det muligt at direkte undersøge lokaliteterne for lokalisering af mistænkte mutationer eller polymorfe steder, og også at studere tilstedeværelsen af andre specifikke træk ved DNA.
[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]