Karyotypering

Korttidsblodkulturer, knoglemarvsceller og fibroblastkulturer bruges oftest til at studere kromosomer. Blod med et antikoagulant, der leveres til laboratoriet, centrifugeres for at sedimentere erytrocytterne, og leukocytterne inkuberes i et dyrkningsmedium i 2-3 dage. Phytohemagglutinin tilsættes blodprøven, da det accelererer agglutinationen af erytrocytter og stimulerer lymfocytdeling. Den mest egnede fase til undersøgelse af kromosomer er mitosens metafase, så colchicin bruges til at stoppe lymfocytdelingen på dette stadie. Tilsætning af dette lægemiddel til kulturen fører til en stigning i andelen af celler i metafasen, det vil sige på det stadie af cellecyklussen, hvor kromosomerne er mest synlige. Hvert kromosom replikerer (producerer sin egen kopi) og er efter passende farvning synligt som to kromatider bundet til centromeren eller den centrale konstriktion. Cellerne behandles derefter med en hypotonisk natriumchloridopløsning, fikseres og farves.

Til farvning af kromosomer anvendes oftest Romanovsky-Giemsa-farvestof, 2% acetcarmin eller 2% acetarsein. De farver kromosomerne helt og jævnt (rutinemetode) og kan bruges til at detektere numeriske anomalier i menneskelige kromosomer.

For at få et detaljeret billede af kromosomstrukturen, identificere (definere) individuelle kromosomer eller deres segmenter, anvendes forskellige metoder til differentiel farvning. De mest almindeligt anvendte metoder er Giemsa, såvel som G- og Q-båndfarvning. Ved undersøgelse af præparationsmikroskopi langs kromosomets længde afsløres et antal farvede (heterokromatin) og ufarvede (eukromatin) bånd. Arten af den tværgående stribering, der opnås på denne måde, gør det muligt at identificere hvert kromosom i sættet, da vekslen af bånd og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

Metafasepladerne i individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer klippes ud fra fotografierne og limes i rækkefølge på et ark papir; dette billede af kromosomer kaldes en karyotype.

Brugen af yderligere farvning, samt nye metoder til at opnå kromosomale præparater, der tillader kromosomer at strækkes i længden, øger nøjagtigheden af cytogenetisk diagnostik betydeligt.

En særlig nomenklatur er blevet udviklet til at beskrive den menneskelige karyotype. Den normale karyotype for en mand og en kvinde betegnes henholdsvis som 46, XY og 46, XX. Ved Downs syndrom, der er karakteriseret ved tilstedeværelsen af et ekstra kromosom 21 (trisomi 21), beskrives kvindens karyotype som 47, XX 21+, og mandens er 47, XY, 21+. Ved strukturel anomali på kromosomet er det nødvendigt at angive den ændrede lange eller korte arm: bogstavet p betegner den korte arm, q betegner den lange arm, og t betegner translokationen. I tilfælde af deletion af den korte arm på kromosom 5 (cri du chat syndrom) beskrives den kvindelige karyotype således som 46, XX, 5p-. Moderen til et barn med translokation Downs syndrom, bærer af den balancerede translokation 14/21, har en karyotype på 45, XX, t(14q; 21q). Translokationskromosomet dannes ved fusion af de lange arme fra kromosom 14 og 21, og de korte arme går tabt.

Hver arm er opdelt i regioner, som igen er opdelt i segmenter, som begge er betegnet med arabertal. Kromosomets centromer er udgangspunktet for at tælle regioner og segmenter.

Således bruges fire betegnelser til kromosomtopografi: kromosomnummer, armsymbol, regionnummer og segmentnummer inden for regionen. For eksempel betyder posten 6p21.3, at vi taler om kromosom 6 i det 6. par, dets korte arm, region 21, segment 3. Der er også yderligere symboler, især pter - enden af den korte arm, qter - enden af den lange arm.

Den cytogenetiske forskningsmetode tillader kun detektion af deletioner og andre ændringer i kromosomer med en størrelse på cirka 1 million baser (nukleotider).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]