Immunfænotypning af hæmoblastoser

Betydelige fremskridt inden for hæmatologisk forskning i de senere år er forbundet med brugen af moderne immunologiske metoder og automatiserede midler til analyse og sortering af perifere blod- og knoglemarvsceller - flowcytometre. Traditionelle morfologiske og cytokemiske undersøgelser af sygdomssubstratceller (blod, rød knoglemarv, lymfeknuder, milt osv.) tillader os i mange tilfælde, især ved lymfoproliferative sygdomme, ikke at identificere hele udvalget af varianter blandt morfologisk lignende former og fastslå oprindelsen af den patologiske klon. Disse problemer kan kun løses ved at studere cellernes immunologiske egenskaber. Hvert trin i differentieringen af hæmatopoietiske celler svarer til sit eget sæt af antigener, som ifølge den internationale klassifikation kaldes differentiering og er opdelt i differentieringsklynger, betegnet CD.

Ved neoplastiske forandringer kan en differentieringsblokering forekomme på ethvert stadie af normal celleudvikling, hvilket resulterer i dannelsen af en klon af patologiske celler, der bestemmer sygdomssubstratet og har de samme immunologiske (eller fænotypiske) karakteristika. Ved at udføre undersøgelser af disse markører på celler er det muligt at bestemme, hvilken form og variant af sygdommen de svarer til, det vil sige, baseret på cellernes immunologiske fænotype, at udføre differentialdiagnostik, hvilket er vanskeligst ved lymfoproliferative sygdomme, fordi hovedcellen i sygdommens patologiske substrat er morfologisk næsten identiske celler.

Fænotypning muliggør brug af monoklonale antistoffer til at typebestemme blast- og modne blodlegemer i myelo-, mono- og lymfocytserien ved tilstedeværelsen af differentieringsantigener (receptorer) i cellevæggen. Afsnittet "Vurdering af kroppens immunstatus" beskriver delvist karakteristikaene og den diagnostiske værdi af studiet af cellulære markører; nedenfor er en kort beskrivelse af cellernes antigenmarkører i relation til diagnosen af hæmoblastoser. Følgende antigener (markører) kan detekteres på membranerne i blodlegemer og rød knoglemarv.

• CD2 er et monomerisk transmembrant glykoprotein. Det findes på overfladen af alle T-lymfocytter, der cirkulerer i blodet, og på nogle NK-lymfocytter. CD2 er involveret i processen med alternativ aktivering af T-lymfocytter. Påvisning af CD2 ved hjælp af monoklonale antistoffer i klinisk praksis anvendes til fænotypning af akut T-celleleukæmi, lymfomer, kroniske inflammatoriske tilstande og immundefekttilstande.
• CD3 er et proteinkompleks associeret med den antigenspecifikke T-cellereceptor, det er den primære funktionelle markør for T-lymfocytter. Det letter overførslen af aktiveringssignalet fra membranen til cellecytoplasmaet. Bestemmelse af CD3 er indiceret til diagnosticering af akut T-celleleukæmi, lymfomer (CD3 udtrykkes ikke i ikke-T-celle lymfoide neoplasmer) og immundefektsygdomme.
• CD4 er et transmembrant glykoprotein, der udtrykkes af en subpopulation af T-hjælpere (induktorer), som udgør 45% af perifere blodlymfocytter. I de tidlige stadier af lymfocytudviklingen i thymus udtrykkes CD4-antigener, såvel som CD8, af alle kortikale lymfocytter. Medullære thymocytter, hvis fænotype ligner modne CD4+ T-celler i perifert blod (T-hjælpere), udtrykker allerede enten CD4- eller CD8-receptorer. I perifert blod bærer op til 5% af cellerne både CD4- og CD8-markører. Mindre ekspression af CD4 er mulig på nogle celler i den monocytiske serie. CD4 udtrykkes i de fleste tilfælde af T-cellelymfomer, herunder mycosis fungoides, såvel som i HTLV-associeret T-celleleukæmi (HTLV - human T-lymfotropisk virus).
• CD5 er et enkeltkædet glykoprotein, der findes på alle modne T-lymfocytter og de fleste thymocytter, og udtrykkes svagt af B-lymfocytter. CD5 detekteres på neoplastiske celler af B-celle kronisk lymfatisk leukæmi og centrocytisk lymfom. Ved andre typer maligne lymfoide sygdomme - follikulært lymfom, hårcelleleukæmi, storcellet lymfom - udtrykkes CD5 ikke.
• CD7 er et enkeltkædet protein, den tidligste markør for T-celledifferentiering. Det udtrykkes af pro-T-lymfocytter, selv før deres migration til thymus. CD7 detekteres på de fleste NK-celler, svag ekspression ses på monocytter. B-lymfocytter og granulocytter indeholder ikke dette antigen. CD7-bestemmelse bruges til at diagnosticere lymfomer, T-celle lymfoblastær leukæmi hos børn.
• CD8 er et protein bestående af to polypeptidkæder forbundet af disulfidbroer. Det udtrykkes af en subpopulation af cytotoksiske og suppressor-T-lymfocytter, som udgør 20-35% af perifere blodlymfocytter. Dette antigen udtrykkes også af NK-lymfocytter, kortikale thymocytter, 30% af medullære thymocytter og en subpopulation af røde knoglemarvsceller. CD8 undersøges for at kvantificere indholdet af T-suppressorer (se afsnittet "Suppressor-T-lymfocytter i blodet" ovenfor).

• CD10 er en cellemembranassocieret endopeptidase. CD10 udtrykkes af unge former af B-lymfocytter og en underpopulation af kortikale lymfocytter. CD10 udtrykkes af alle ALL-celler.
• CD11c udtrykkes på cellemembranen af makrofager, monocytter, granulocytter, NK-celler og hårcelleleukæmiceller.
• CD13 er et glykoprotein, der udtrykkes af celler i den myelomonocytiske afstamning (progenitorceller, neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocytter og myeloide leukæmiceller). Det findes ikke i T- og B-lymfocytter, erytrocytter og blodplader.
• CD14 er et overflademembranglykoprotein. Det udtrykkes hovedsageligt af monocytter og makrofager. CD14 detekteres på mere end 95% af monocytter i perifert blod og knoglemarv. Stærk ekspression af CD14 observeres ved akut myeloblastær leukæmi. Dette antigen udtrykkes ikke ved akut og kronisk lymfatisk leukæmi.
• CD15 er et oligosaccharid. Det er involveret i fagocytose og kemotaksi. Dette antigen findes på overfladen af modne granulocytter og Berezovsky-Sternberg-celler. Ekspression af CD15-antigenet detekteres ved Hodgkins sygdom. Ved ikke-Hodgkins lymfomer detekteres CD15 ikke i de fleste tilfælde.
• CD16 udtrykkes på overfladen af granulocytter, monocytter, makrofager og NK-celler. Alle lymfocytter, der udtrykker dette antigen, har kapacitet til antistofafhængig cellulær cytotoksicitet. CD16 bestemmes under typning af kroniske myelocytiske leukæmier for at karakterisere NK-celler.
• CD19 er et glykoprotein, der findes på alle perifere B-lymfocytter og alle B-celleforløbere. Det findes ikke i plasmaceller. Det er den tidligste markør for B-celler og spiller en vigtig rolle i reguleringen af B-celleaktivering og -proliferation. CD19 udtrykkes på alle neoplastiske celler ved akut leukæmi af B-celleoprindelse og er også til stede i nogle former for akut monoblastisk leukæmi.
• CD20 er et ikke-glykosyleret protein. I ontogenesen af B-lymfocytter optræder CD20-antigenet efter CD19 i stadiet af præ-B-celledifferentiering af lymfocytter. Det er fraværende fra plasmamembranen i plasmaceller. Det udtrykkes i ALL, kronisk lymfatisk B-celle-leukæmi, hårcelleleukæmi, Burkitts lymfom og meget sjældent i akut monoblastisk leukæmi.
• CD21 er et glykoprotein, der findes i betydelige mængder på B-lymfocytter i lymfoide organer og i små mængder på B-celler i perifert blod. CD21 er en receptor for Epstein-Barr-virus.
• CD22 er et protein bestående af to polypeptidkæder. Det udtrykkes på membranen af de fleste B-lymfocytter, inklusive precursorceller (prolymfocytter). Antigenet udtrykkes ikke på B-lymfocytter (plasmaceller) efter deres aktivering. Den mest udtalte ekspression af CD22 detekteres på celler i hårcelleleukæmi, svag - i myeloid leukæmi og ikke-T-celle ALL.
• CD23 er et glykoprotein, der i langt højere grad udtrykkes af aktiverede perifere blod-B-lymfocytter. CD23 medierer IgE-afhængig cytotoksicitet og fagocytose af makrofager og eosinofiler.
• CD25 er et enkeltkædet glykoprotein, der er identificeret som en receptor med lav affinitet for IL-2. Denne receptor udtrykkes på aktiverede T-lymfocytter og, i en lavere tæthed, på aktiverede B-celler. I det perifere blod hos raske individer er antigenet til stede på mere end 5% af lymfoide celler.
• CD29 er en fibronektinreceptor. Den er bredt fordelt i væv og udtrykkes af leukocytter. CD29-detektion på perifere blodlegemer bruges til at typebestemme en subpopulation af T-celler med CD4+CD29+ fænotypen, som kaldes type 2-hjælpere (Th2). Disse celler deltager i det humorale immunrespons ved at producere lymfokiner.
• CD33 er et transmembrant glykoprotein. Det findes på overfladen af celler i den myeloide og monocytiske serie. Det findes på overfladen af monocytter og i mindre grad granulocytter i perifert blod. Cirka 30 % af røde knoglemarvsceller udtrykker CD33, herunder myeloblaster, promyelocytter og myelocytter. Antigenet er fraværende i membranerne i pluripotente stamceller. CD33-bestemmelse bruges til at karakterisere celler i leukæmier af myeloid oprindelse. Leukæmiceller af lymfoid og erytroid oprindelse udtrykker ikke CD33.
• CD34 er et fosfoglycoprotein, der udtrykkes af hæmatopoietiske progenitorceller, herunder monopotente stamceller. Den mest udtalte ekspression af Ag observeres i tidlige progenitorceller; efterhånden som cellerne modnes, falder markørekspressionen. CD34 findes også på endotelceller. CD34-bestemmelse bruges til at karakterisere celler i akutte myeloblastiske og lymfoblastiske leukæmier. Ved kroniske lymfocytiske leukæmier og lymfomer detekteres CD34-antigenekspression ikke.

• CD41a udtrykkes af blodplader og megakaryocytter. Monoklonale antistoffer til at detektere CD41a bruges til at diagnosticere megakaryoblastisk leukæmi. Ved Glanzmanns trombasteni er ekspressionen af dette antigen fraværende eller signifikant undertrykt.
• CD42b er et membranglykoprotein bestående af to polypeptidkæder. Markøren detekteres på overfladen af blodplader og megakaryocytter. I klinisk praksis bruges detektion af CD42b til at diagnosticere trombocytopati - Bernard-Soulier syndrom.
• CD45RA tilhører klassen af transmembrane glykoproteiner. Det er et almindeligt leukocytantigen. Det udtrykkes på cellemembranen af B-lymfocytter, i mindre grad T-lymfocytter og på modne medullære thymocytter. Markøren udtrykkes ikke af granulocytter.
• CD45RO er en lavmolekylær isoform af CD45RA, et almindeligt leukocytantigen. Det detekteres på T-celler (memory T-lymfocytter), en underpopulation af B-lymfocytter, monocytter og makrofager. Monoklonale antistoffer mod CD45RO interagerer med de fleste thymocytter, en underpopulation af hvilende CD4+ og CD8+ T-lymfocytter, og modne aktiverede T-celler. Celler af myelomonocytisk oprindelse, granulocytter og monocytter bærer også dette antigen. Det detekteres i centroblastiske og immunoblastiske lymfomer.
• CD46 er en O-glykosyleret dimer. Den er bredt fordelt i væv og udtrykkes af T- og B-lymfocytter, monocytter, granulocytter, NK-celler, blodplader, endotelceller og fibroblaster, men findes ikke på overfladen af røde blodlegemer. CD46 yder vævsbeskyttelse mod komplement.
• CD61 er et blodpladeantigen. Det udtrykkes på blodplader i perifert blod og rød knoglemarv, såvel som på megakaryocytter og megakaryoblaster. Dets bestemmelse bruges som en markør ved akut megakaryoblastisk leukæmi. Antigenekspression er fraværende eller undertrykt hos patienter med Glanzmanns trombasteni.
• CD95, også kaldet Fas eller APO-1, er et transmembrant glykoprotein, et medlem af tumornekrosefaktorreceptorfamilien. Det udtrykkes i betydelige mængder på T-lymfocytter (CD4+ og CD8+) i perifert blod og i mindre grad på B-lymfocytter og NK-celler. Dette antigen udtrykkes også på granulocytter, monocytter, vævsceller og neoplastiske celler. Binding af CD95 til Fas-liganden (CD95L) inducerer apoptose i celler.
• CD95L, eller Fas-ligand, er et membranprotein, der tilhører tumornekrosefaktorreceptorfamilien. Dette antigen udtrykkes af cytotoksiske T-lymfocytter, NK-celler og meget ofte tumorceller; det er den primære inducer af apoptose i celler.
• HLA-DR er en monomorf determinant af klasse II-molekyler i det humane større histokompatibilitetskompleks (HLA). Markøren udtrykkes på Langerhanske celler, dendritiske celler i lymfoide organer, visse typer makrofager, B-lymfocytter, aktiverede T-celler og thymiske epitelceller. Undersøgelsen af denne markør bruges til kvantitativ bestemmelse af aktiverede T-lymfocytter med CD3+ HLA-DR+ fænotypen.

Ved at bruge et andet udvalg af monoklonale antistoffer mod markører er det muligt at skabe et fænotypisk portræt af celler, der er karakteristiske for en given form for leukæmi.

Ud over brugen af immunfænotypningsmetoder til diagnostik og differentialdiagnostik af hæmoblastoser har deres anvendelse i behandlingsprocessen til at vurdere remissionstilstanden og den resterende population af leukæmiceller vist sig at være særlig vigtig. Kendskab til det fænotypiske "portræt" af blastceller i diagnoseperioden gør disse markører det muligt at detektere celler af den leukæmiske klon i remissionsperioden og ved stigningen i deres antal at forudsige udviklingen af et tilbagefald længe før (1-4 måneder) forekomsten af dets kliniske og morfologiske tegn.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]