Immunofenotyping af hæmoblastoser

Betydelige fremskridt i hæmatologiske undersøgelser forbundet i de seneste år med anvendelsen af moderne immunologiske metoder og automatiserede værktøjer til analyse og sortering celler fra perifert blod og knoglemarv - flowcytometre. Traditionelle morfologiske og cytokemiske undersøgelse af substratet celle sygdom (blod, røde knoglemarv, lymfeknuder, milt, etc.), i mange tilfælde, især i lymfoproliferative sygdomme, ikke afslører hele række indstillinger blandt morfologisk lignende former og identificere oprindelsen af den patologiske klon . Disse problemer kan kun løses ved at studere de immunologiske egenskaber ved celler. Hver fase af differentiering af hæmatopoietiske celler har sit eget sæt af antigener, som er på den internationale klassifikation kendt som differentiering og differentiering er opdelt i klynger, der er udpeget cd.

Ved blok differentiering af neoplastiske forandringer kan forekomme på ethvert stadium af normal celleudvikling, hvilket resulterer i en patologisk celleklon afgrænser substrat sygdom, og som har den samme immunologiske (eller fænotypisk) karakteristik. Efter en undersøgelse af disse markører i celler kan bestemmes ved enhver form eller udformning af sygdommen er konsistente, dvs. På grundlag af immunologisk cellefænotype differentialdiagnose, som er den mest vanskelige i lymfoproliferative lidelser, fordi de vigtigste celle substrat patologiske sygdomme er næsten den samme type celler morfologisk.

Fænotypebestemmelse tillader anvendelse af monoklonale antistoffer præget blastiske celler og modne myeloid blod, mono-, lymfocytisk serie i nærvær af differentierings-antigener (receptorer) i cellevæggen. I afsnittet "Evaluering af organismernes immunstatus" er de karakteristiske og diagnostiske betydning af cellemarkører delvist beskrevet; Nedenfor er en kort beskrivelse af antigeniske cellemarkører anvendt til diagnosen hæmostrose. På membranerne af blodlegemer og rød knoglemarv kan følgende antigener (markører) identificeres.

• CD2 er et monomert transmembran glycoprotein. Det er til stede på overfladen af alle cirkulerende T-lymfocytter og nogle NK-lymfocytter. CD2 deltager i processen med alternativ aktivering af T-lymfocytter. Påvisning af CD2 ved anvendelse af monoklonale antistoffer i klinisk praksis anvendes til fænotypning af akutte T-celle leukemier, lymfomer, kroniske inflammatoriske og immunodeficiente tilstande.
• CD3 - et proteinkompleks forbundet med en antigen-specifik T-cellereceptor, er den vigtigste funktionelle markør for T-lymfocytter. Det letter overførslen af aktiveringssignalet fra membranen til cytoplasmaet i cellen. CD3-detektion er indiceret til diagnosticering af akut T-celle leukæmi, lymfom (CD3 er ikke udtrykt i ikke-T-celle lymfoide tumorer) og immunodefekt sygdomme.
• CD4 - transmembran glycoprotein udtrykkes af en undergruppe af T-hjælper (spoler) udgør 45% af perifere blodlymfocytter. I de tidlige stadier af lymfocytudvikling i thymus, CD4-antigener, samt af CD8, udtrykt alle kortikale lymfocytter. Medullære thymocytter, der svarer til fænotypen af modne CD4 + perifere blod T-celler (hjælper-T-celler), enten allerede udtrykker CD4, eller CD8-receptorer. I perifert blod mærkes op til 5% af cellerne samtidigt CD4 og CD8. Lille ekspression af CD4 er mulig på nogle monocytceller. CD4 udtrykkes i de fleste tilfælde, T-cellelymfom, herunder mycosis fungoides, og i HTLV-associeret T-celle-leukæmi (HTLV - human T-lymfotropisk virus - human T-lymfotropisk virus).
• CD5 - et enkeltkædet glycoprotein, der er til stede på alle modne T-lymfocytter og de fleste thymocytter, udtrykkes svagt med B-lymfocytter. CD5 detekteres på neoplastiske celler af B-celle kronisk lymfocytisk leukæmi og centro-cytisk lymfom. I andre typer af maligne lymfoide sygdomme - follikulært lymfom, hårcellet leukæmi, storcellelymfom - CD5 er ikke udtrykt.
• CD7 er et enkeltstrenget protein, den tidligste markør for T-celledifferentiering. Det udtrykkes af pro-T-lymfocytter, selv før de migrerer til thymus. CD7 detekteres på de fleste NK-celler, svag ekspression er noteret på monocytter. B-lymfocytter og granulocytter indeholder ikke dette antigen. Definitionen af CD7 anvendes til diagnose af lymfomer, børns T-celle lymfoblastisk leukæmi.
• CD8 er et protein bestående af to polypeptidkæder forbundet med disulfidbroer. Det udtrykkes af en subpopulation af cytotoksiske og suppressor-T-lymfocytter, som omfatter 20-35% af perifere blodlymfocytter. Dette antigen har også NK lymfocytter, kortikale thymocytter, 30% medulære thymocytter og en subpopulation af røde knoglemarvsceller. CD8 undersøges for kvantitativ evaluering af T-suppressorindhold (se afsnittet "T-lymfocytter-suppressorer i blodet" ovenfor).

• CD10 er endopeptidasen associeret med cellemembranen. CD10 udtrykker unge former for B-lymfocytter og en subpopulation af cortical lymfocytter. CD10 udtrykker alle celler af ALL.
• CD11c-ekspressionsmakrofager, monocytter, granulocytter, NK-celler og hårede celle-leukæmiceller på cellemembranen.
• CD13 - glycoprotein udtrykt af celler i myelomonocytisk serien (progenitorceller, neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocytter og celler af myeloid leukæmi). Det er fraværende i T- og B-lymfocytter, erythrocytter og blodplader.
• CD14 er et overflade membran glycoprotein. Det udtrykkes hovedsageligt af monocytter og makrofager. CD14 detekteres i mere end 95% monocytter af perifert blod og knoglemarv. Stærkt ekspression af CD14 observeres ved akut myeloblastisk leukæmi. Ved akut og kronisk lymfoblastisk leukæmi udtrykkes dette antigen ikke.
• CD15 er et oligosaccharid. Han deltager i phagocytose og kemotaksis processer. Dette antigen er til stede på overfladen af modne granulocytter og Berezovsky-Sternberg-celler. CD15 antigen-ekspression detekteres i Hodgkins sygdom. I ikke-Hodgkins lymfomer registreres CD15 i de fleste tilfælde ikke.
• CD16 udtrykkes på overfladen af granulocytter, monocytter, makrofager og NK-celler. Alle lymfocytter der udtrykker dette antigen har evnen til antistofafhængig cellulær cytotoksicitet. CD16 bestemmes ved indtastning af kroniske myelocytiske leukæmier for at karakterisere NK-celler.
• CD19 er et glycoprotein til stede på alle perifere B-lymfocytter såvel som på alle B-celleprecursorer. Det er fraværende på plasmaceller. Dette er den tidligste markør for B-celler, spiller en vigtig rolle i regulering af aktivering og proliferation af B-lymfocytter. CD19 udtrykkes på alle neoplastiske celler af akut leukæmi af B-celle oprindelse, og er også til stede i nogle former for akut monoblast leukæmi.
• CD20 er et ikke-glycosyleret protein. I ontogenese af B-lymfocytter fremkommer CD20 antigenet efter CD19 i scenen af præ-B-celledifferentiering af lymfocytter. Det er fraværende på plasmamembranen af plasmaceller. Det er udtrykt i ALLE, B-celle kronisk lymfocytisk leukæmi, hårig celle leukæmi, Burkitt lymfom og meget sjældent i akut monoblast leukæmi.
• CD21 er et glycoprotein, i en signifikant mængde er til stede på B-lymfocytter i lymfoide organer og i en lille mængde på B-celler i perifert blod. CD21 er en receptor til Epstein-Barr-viruset.
• CD22 er et protein bestående af to polypeptidkæder. Det udtrykkes på membranen af de fleste B-lymfocytter, herunder progenitorceller (prolymphocytter). Antigenet udtrykkes ikke på B-lymfocytter (plasmaceller) efter deres aktivering. Det mest udtalte udtryk for CD22 detekteres på celler med hårcelledukæmi, svag - i myeloid leukæmier og ikke-T-celle ALL.
• CD23 er et glycoprotein udtrykt af aktiverede B-lymfocytter af perifert blod i langt større grad. CD23 medierer IgE-afhængig cytotoksicitet og fagocytose af makrofager og eosinofiler.
• CD25 er et enkeltkædet glycoprotein identificeret som en lavaffinitetsreceptor for IL-2. Denne receptor udtrykkes på aktiverede T-lymfocytter og ved en lavere densitet på aktiverede B-celler. I det perifere blod hos raske mennesker er antigenet til stede i mere end 5% af lymfoide celler.
• CD29 er en fibronektinreceptor. Det er bredt fordelt i væv, det udtrykkes af leukocytter. CD29-påvisning på perifere blodceller anvendes til at karakterisere en subpopulation af T-celler med CD4 + CD29 + -fænotypen, som kaldes Type 2-hjælper (Th2). Disse celler, gennem produktion af lymfokiner, deltager i realiseringen af det humorale immunrespons.
• CD33 er et transmembran glycoprotein. Det er til stede på overfladen af celler i den myeloid og monocytiske serie. Det findes på overfladen af monocytter og i mindre grad granulocytter af perifert blod. Ca. 30% af røde knoglemarvsceller udtrykker CD33, herunder myeloblaster, promyelocytter og myelocytter. Antigen er fraværende på membraner af pluripotente stamceller. CD33 bruges til at karakterisere celler i myeloid leukæmier. Leukæmiceller af lymfoid og erythroid oprindelse udtrykker ikke CD33.
• CD34 er et phosphoglycoprotein, udtrykt af hæmatopoietiske stamceller, herunder monopotente stamceller. Det mest udtalte udtryk for Ar ses i tidlige forfædre; når cellerne modnes, falder markørens udtryk. CD34 findes også på endotelceller. CD34 bruges til at karakterisere celler i akut myelogen og lymfoblastisk leukæmi. Ved kronisk lymfocytisk leukæmi og lymfomer er CD34 antigen-ekspression ikke påvist.

• CD41a udtrykkes af blodplader og megakaryocytter. Monoklonale antistoffer til CD41a-detektion anvendes til at diagnosticere megakaryoblastisk leukæmi. Med Glązmann thrombasthenia er ekspressionen af dette antigen fraværende eller signifikant undertrykt.
• CD42b er et membran glycoprotein bestående af to polypeptidkæder. Markøren findes på overfladen af blodplader og megakaryocytter. I klinisk praksis anvendes detektion af CD42b til diagnosticering af trombocytopati - Bernard-Soulier syndrom.
• CD45RA tilhører klassen af transmembran glycoproteiner. Dette er et almindeligt leukocytantigen. Det udtrykkes på cellemembranen af B-lymfocytter, i mindre grad T-lymfocytter og på modne medullære thymocytter. Markøren udtrykkes ikke af granulocytter.
• CD45RO er en isoform med lav molekylvægt af CD45RA - en almindelig leukocyt Ag. De findes på T-celler (memory T-lymfocytter), subpopulationer af B-lymfocytter, monocytter og makrofager. Monoklonale antistoffer mod CD45RO interagerer med de fleste thymocytter, en subpopulation af hvile CD4 + og CD8 + T-lymfocytter og modne aktiverede T-celler. Celler af myelomonocytisk oprindelse, granulocytter og monocytter bærer også dette antigen. Det detekteres i centroblastiske og immunoblastiske lymfomer.
• CD46-0-glycosyleret dimer. Det er vidt udbredt i væv og udtrykt T- og B-lymfocytter, monocytter, granulocytter, NK-celler, blodplader, endotelceller, fibroblaster, men er fraværende på overfladen af erytrocytter. CD46 giver vævsbeskyttelse mod komplement-virkning.
• CD61 er et blodpladeantigen. Det er udtrykt på blodplader af perifert blod og rødt knoglemarv, såvel som på megakaryocytter og megacaryoblaster. Dens definition anvendes som en markør for akut megakaryoblastisk leukæmi. Ekspression af antigen er fraværende eller undertrykt hos patienter med Glanzmann thrombastenia.
• CD95, også kaldet Fas eller APO-1, er et transmembran glycoprotein, et medlem af familien af receptorer af tumor nekrosefaktor. Det udtrykkes i signifikante mængder på T-lymfocytter i perifert blod (CD4 + og CD8 +) og i mindre grad på B-lymfocytter og NK-celler. Dette antigen udtrykkes også på granulocytter, monocytter, vævsceller og neoplastiske celler. Binding af CD95 til Fas-liganden (CD95L) inducerer apoptose i cellerne.
• CD95L eller Fas-ligand, et membranprotein, der tilhører familien af receptorer af tumornekrosefaktor. Dette antigen udtrykkes af cytotoksiske T-lymfocytter, NK-celler og meget ofte af tumorceller; den vigtigste inducer for apoptose i celler.
• HLA-DR er en monomorf determinant af klasse II molekyler af det vigtigste humane histokompatibilitetskompleks (HLA). Markøren udtrykkes på Langerhans-celler, dendritiske celler af lymfoide organer, bestemte typer af makrofager, B-lymfocytter, aktiverede T-celler og epitelceller fra thymus. Testen for denne markør anvendes til at kvantificere aktiverede T-lymfocytter med fænotypen CD3 + HLA-DR +.

Ved anvendelse af et andet udvalg af monoklonale antistoffer til markører er det muligt at lave et fænotypisk portræt af celler, der er karakteristiske for en given form for leukæmi.

Udover at bruge Immunfænotypebestemmelse teknikker til diagnose og differentialdiagnose af hæmatologiske maligniteter, særligt vigtigt vendte deres anvendelse i behandlingsprocessen at vurdere tilstanden af remission og resterende population af leukæmiceller. Kendskab til den fænotypiske "portræt" af blastceller i perioden diagnose, til disse markører den kan finde celle leukæmiske klon i remission, og af stigningen i deres antal - at forudsige udviklingen af tilbagefald lang (for 1-4 måneder), indtil dens kliniske og morfologiske træk.

[1], [2], [3], [4],