Hemopoietiske stamceller af navlestrengsblod

Navlestrengsblod fungerer som en kilde til hæmatopoietiske stamceller på de proliferative potentialer og repopulationskapaciteter af hæmatopoietiske celler. Det har gentagne gange vist sig, at navlestrengsblodet på leveringstidspunktet indeholder et tilstrækkeligt stort antal dårligt engagerede hæmatopoietiske stamceller. Nogle forfattere mener, at fordelen ved at transplantere hæmatopoietiske stamceller i ledningsblod er, at der ikke er behov for at søge efter en donor kompatibel med HLA-antigener. Ifølge dem, umodenhed af nyfødte immunsystem årsager faldt funktionelle aktivitet af immunkompetente celler og dermed lavere end ved knoglemarvstransplantation, forekomsten af alvorlig reaktion "transplantat versus vært". I denne celle transplantation overlevelse af navlestrengsblod ikke er lavere end knoglemarvsceller, selv i tilfælde af anvendelse af et mindre antal GSK administreret per 1 kg af patientens vægt. Men efter vores mening det optimale antal spørgsmål transplanteret navlestrengsblod celler, der er nødvendige for en effektiv transplantation i kroppen af modtageren, deres immunologiske kompatibilitet, og en række andre aspekter af transplantation af hæmatopoietiske stamceller fra navlesnorsblod kræver mere seriøs analyse.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

Opnåelse af hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod

Proceduren for at opnå hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod kræver dens indtagelse umiddelbart efter fødslen og dets adskillelse fra placenta, når placenta er in utero eller ex livmoderen, samt for kejsersnit, men også ex utero. Det er vist, at i tilfælde af en reduktion i tiden fra fødslen til adskillelse af den nyfødte fra moderkagen til 30 sekunder, øges den opnåede mængde ledningsblod i gennemsnit med 25-40 ml. Ved en senere procedure går den samme mængde blod tabt. Det er fastslået, at den tidlige adskillelse af barnet fra efterbrændingen ikke medfører negative konsekvenser for den nyfødte.

Den russiske Research Institute of Hematology and Blood Transfusion udviklede effektiv og billig teknologi til både navlestrengsblod ved fysiologiske slægter ((70,2 + 25,8) ml) og kejsersnit ((73,4 + 25,1) ml). Fremgangsmåde til adskillelse af navlestrengsblod med et tilstrækkeligt højt udbytte af mononukleære celler og nukleeret - (83,1 + 9,6) og (83,4 + 14,1)% hhv. Forbedret fremgangsmåde til kryopræservering af navlestrengsblod, som sikrer en høj sikkerhed af mononukleære celler og CFU-GM - (96,8 + 5,7) og (89,6 + 22,6)% hhv. Effektiviteten af dræningsmetoden til trådblodprøveudtagning ved hjælp af "Kompoplast-300" -beholderen (Rusland) blev bestemt. Fence navlestrengsblod forfattere udført umiddelbart efter fødslen og dens adskillelse fra moderkagen, med hensyn til at placere moderkagen i livmoderen eller ex utero. Før punktering af navlevenen navlestrengen en gang behandlet med 5% tinktur af iod, og derefter to gange - 70% ethylalkohol. Blodet strømmer gennem forbindelsesrørene til beholderen spontant. Varigheden af hegnet tog ikke mere end 10 minutter. 66 indsamlede dræning volumen metode navlestrengen blodprøver gennemsnit (72 + 28) ml, og antallet af leukocytter i prøven gennemsnit fuld - (1,1 + 0,6) x x 107. Analysen af navlestrengsblod til sterilitet (bakteriekontaminering, HIV-1-vira af hepatitis B og C, syfilis og cytomegalovirus infektion) i kun én prøve blev identificeret IgG-antistoffer mod hepatitis C i en anden undersøgelse, når placenta efter fødslen føtal overflade blev anbragt på en speciel ramme nedad, blev ledningen behandlet med 5% natrium jod og 75% ethyl th alkohol. Vene i navlestrengen blev drænet med en nål fra transfusionssystemet (G16). Blodet drænes spontant i beholderen. Antallet af blod taget på denne måde i gennemsnit (55 + 25) ml. Papiret G. Kogler et al (1996) navlestrengsblod taget lukket måde og opnåede store mængder af blod - i gennemsnit (79 + 26) ml. Forfatterne bemærker, at blandt 574 navlestrengsblod prøver indeholder ca. 7% mindre end 40 ml blod, som ikke tillader at bruge dem til transplantation. K. Isoyama et al (1996), idet navlestrengsblod ved aktiv exfusion anvendelse sprøjter, fik et gennemsnit på 69,1 ml blod (navlestrengsblod varierede fra 15 til 135 ml). Endelig blev A. Abdel-Mageed PI samarbejdspartnere (1997) efter punovinnoy vene kateterisering opnået i gennemsnit 94 ml navlestrengsblod (fra 56 til 143 ml).

At reducere risikoen for iatrogen infektion og forurening med maternelle sekreter udviklede lukket system blodtapning baseret på det udbredte transfuzioinoy systemet Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA) indeholdende 62,5 ml CPDA (citrat-phosphat-dextrose med adenin) som antikoagulant. Teknologien til fremstilling af materiale er af afgørende betydning for fremstillingen af en kvalitet prøve i forhold til mængden af indhold og renhed af cellesuspensionen. De eksisterende metoder til navlestrengsblod indsamling, kotoryeuslovno klassificeres i lukket, halvåbne og åbent system sleduetotdavat præference først, som i et lukket system reducerer risikoen for mikrobiel kontaminering af materialet, samt kontaminering af cellesuspensionen af moderen celle.

A. Nagler og medforfattere (1998) foretog en sammenlignende analyse af virkningen af alle tre blodprøveudtagningssystemer. I den første variant blev proceduren udført i et lukket system ved eksfusion af blod direkte ind i beholderen. I den anden variant blev snorblod opnået ved fremgangsmåden til aktivt blodeksfusion af sprøjter1 med yderligere vask af blodårernes vener og samtidig dræning af blod i beholderen (åben metode). I den tredje variant blev blodet trukket tilbage i et semi-åbent system ved aktivt at ekstrahere det med sprøjter og vaske gennem navlenes navlestreng med samtidig eksfusion i beholderen. I den første version modtog forfatterne navlestrengsblod i volumenet (76,4 + 32,1) ml med et leukocytantal (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ pr. 1 ml blod. I den anden variant var de tilsvarende indekser (174,4 + 42,8) ml og (8,8 + 3,4) x ¹⁰⁶ / ml; i den tredje - (173,7 + 41,3) ml og (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Den hyppigste infektion af navlestrengsblodprøver blev noteret ved anvendelse af et åbent system. Der er etableret en direkte sammenhæng mellem placentamassen og mængden af ekstraheret blod - med stigende placentamasse øges mængden af blod, som opsamles.

Efter prøveudtagningen af navlestrengsblod følger separationstrinnet isolering af mononukleære celler og oprensning af cellesuspensionen fra erythrocytter. Under eksperimentelle betingelser isoleres de nucleerede celler ved fremgangsmåden til deres sedimentering med methylcellulose under lysis af ammonium erythrocytter med chlorid. Men til kliniske formål bør methylcellulose ikke anvendes, da tabet af hæmatopoietiske stamceller når 50-90%. Lysering af røde blodlegemer i forbindelse med store volumener af arbejdsopløsningen i klinikken også næppe gennemføres, skønt procentdelen af adskillelse på denne måde nukleeret celler med fænotypen af CD34 +, og progenitorceller CFU-GM funktioner og CFU-GEMM betydeligt højere. En ny agent til isolering af mononukleære celler i densitetsgradient buyant density solution (BDS72) er blevet rapporteret. Dette stof har følgende fysiologiske parametre: pH - 7,4, osmolalitet - 280 mosm / kg, densitet - 1,0720 g / ml. Ifølge forfatterne er det med sin hjælp muligt at isolere op til 100% af CD34-positive celler og fjerne 98% røde blodlegemer. Men klinikken anvender endnu ikke BDS72.

Separationsmetoderne testede kerneholdige celler fra navlestrengsblod anvendes typisk en 10% HES opløsning eller 3% gelatineopløsning. Effektiviteten af udfældning af erythrocytter og isolering af nucleerede celler i begge tilfælde er omtrent ens. Men i tilfælde af anvendelse som et sedimenterende middel gelatine muligt at opnå en noget større antal af CFU-GM, end ved anvendelse af HES. Det antages, at forskellen i genudvindingseffektiviteten CFU-GM ulige hastighed som følge af aflejring af individuelle fraktioner eller nukleerede celler evne HES molekyler absorberet på hæmatopoietiske celleoverfladereceptorer og dermed blokere deres følsomhed over for kolonistimulerende faktorer, som bruges, når dyrkning af CFU-GM in vitro. Ikke desto mindre kan begge sedimenter være velegnede til isolering af nucleerede celler, når der oprettes storskala navlestrengsblodbanker.

Metoder til adskillelse og kryopreservering af navlestrengsblod i princippet adskiller sig ikke fra dem, der anvendes i arbejdet med hæmatopoietiske stamceller af perifert blod og knoglemarv hos voksne donorer. Men når man forbereder et stort antal navlestrengsblodprøver til sine banker, skal separationsmetoderne først og fremmest være lave omkostninger. Derfor anvendes desværre for kliniske behov allerede rutinemæssige metoder til isolering og cryopreservering af navlestrengsblodceller, og mere effektive, men økonomisk effektive metoder forbliver masser af eksperimenter.

Generelt blev kriterierne for estimering af antallet af hæmatopoietiske celler og kravene til undersøgelse af navlestrengsblodprøver etableret for at identificere infektiøse midler. For at sikre transplantation af hæmatopoietiske blodblodceller skal alle blodprøver undersøges primært for hæmatogene infektioner og genetiske sygdomme. Nogle forfattere anbefale yderligere særlige metoder til undersøgelse af navlesnorsblod med henblik på at diagnosticere genetiske sygdomme såsom thalassæmi og seglcelleanæmi, adenosindeaminase mangel, agammaglobulinæmi Bruton, sygdom Harlera og punter.

Ifølge anbefalingerne Ticheli L. Et al (1998), i hver prøve af navlestrengsblod er nødvendig for at bestemme antallet af celler med kerne, SB34-positive celler og CFU-GM, bære HLA-typebestemmelse til bestemmelse af blodtype ABO og Rh medlemskabet. Desuden er podning gennemføres bakteriologiske, serologiske tests for HIV og CMV-infektion, HBsAg, hepatitis C, HTLY-I og HTLV-II (T-celleleukæmi, menneske), syfilis, toxoplasmose. En polymerasekædereaktion til cytomegalovirus og HIV-infektion er obligatorisk.

Selve proceduren for opnåelse af ledningsblod bør udføres i overensstemmelse med principperne for medicinsk bioetik. Før starten af blodindsamling er det nødvendigt at opnå samtykke fra den gravide kvinde til dens gennemførelse. Preliminært interview med en gravid kvinde for at opnå informeret samtykke til at udføre alle manipulationer, fra blodeksfusion til færdiggørelse af dokumentation, udføres kun af medicinsk personale. Under alle omstændigheder må afvises udfører nogen af disse procedurer ved personale med biologiske, kemiske, farmaceutiske og andre ikke-medicinsk uddannelse, i betragtning af overtrædelse af de etablerede normer for bioetik og menneskerettigheder. For positive test for bærer HBsAg, antistoffer mod det kausative middel for hepatitis C, HIV og syfilis navlestrengsblod ikke taget, og de opsamlede blodprøver er allerede kasseres og destrueres. Det skal bemærkes, at transport af latente infektioner hos nyfødte er meget sjældnere end hos voksne, derfor sandsynligheden for hæmatogen overførsel og udvikling af infektiøse komplikationer af hæmatopoietiske infusioner af navlestrengsblodceller er betydeligt lavere end i tilfældet med transplantation af knoglemarv fra voksne donorer.

Et vigtigt punkt for anvendelse af navlestrengsblod i klinikken er evalueringen af implantatet, som er baseret på kvantificering af hæmatopoietiske stamceller i en prøve af navlestrengsblodceller, og doserne er nødvendige for transplantation. Standarder for det optimale antal navlestrengsblodceller, der kræves til transplantation, er endnu ikke blevet udviklet. Der er ingen generelt accepteret synspunkt selv på sådanne rutinemæssige parametre som antallet af CD34-positive celler og CFU-GM. Nogle forfattere evaluerede potentialet af hæmatopoietiske celler ved analyse af langvarige kulturer med bestemmelse af indholdet af kolonidannende enheder fælles for granulocytter, erythrocytter, monocytter og megakaryocytter - CFU-GEMM.

I kliniske indstillinger indbefatter standardevalueringen af ledningsblodtransplantation normalt kun bestemmelsen af antallet af nucleerede eller mononukleære celler.

Opbevaring af hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod

Nogle problemer eksisterer i teknologien til lagring af hæmatopoietiske ledningsblodceller. Når kryopræservering af hæmatopoietiske stamceller for at nå deres optimale frysning tilstand skal minimere mængden af navlestrengsblod og røde blodlegemer, der tidligere er fjernet for at undgå hæmolyse og risikoen for uforenelighed omsætning af erytrocytantigener (ABO, Rh). Til disse formål er forskellige fremgangsmåder til isolering af nucleerede celler egnede. I begyndelsen af 90'erne af sidste århundrede den mest udbredte fremgangsmåde til separering kerneholdige celler i en densitetsgradient baseret på Ficoll med en densitet på 1,077 g / ml, eller perkolering med densitet 1,080 g / ml. Separation navlestrengsblod ved densitetsgradientcentrifugering tillader udvælgelse overvejende mononukleære celler, men fører til betydelige tab af hæmatopoietiske progenitorceller - op til 30-50%.

Sedimenteringseffektiviteten af hydroxyethylstivelse i processen med isolering af navlestrengsblodceller anslås på forskellige måder. Nogle forfattere indikerer en lav separationskvalitet ved hjælp af denne metode, mens andre forskere tværtimod blandt alle mulige metoder foretrækker at tildele HSC-streng blod præcist ved hjælp af en 6% opløsning af hydroxyethylstivelse. Dette fremhæver den høje effektivitet af sedimentering af hæmopoietiske celler, som ifølge nogle data når fra 84% til 90%.

Tilhængere af et andet synspunkt tror, at næsten alle neddeling involverer store tab yadrosoderzhashih celler og tilbyde at gøre adskillelsen ved centrifugering, der adskiller navlestrengsblod i 3 fraktioner: erythrocyt, leukocyt- og plasma ring. Adskillelse af cellerne på denne måde, har opfinderne fundet, at indholdet af de mononukleare celler fra tidlige hæmatopoietiske progenitorceller og celler med CD34 + immunfænotype sidste ende var henholdsvis 90, 88 og 100% af det oprindelige niveau. Lignende mængder af oprenset vækst i denne fremgangsmåde til navlestrengsblod celler opnået af andre forskere: efter sedimentering nucleerede tildelt 92%, 98% - mononukleære, 96% - CD34-positive celler og 106% af kolonidannende enheder.

I slutningen af 1990'erne blev gelatine almindeligt anvendt som et sedimenterende middel. I klinisk praksis er hæmatopoietiske stamceller fra navlestrengsblod ved hjælp af gelatine blevet isoleret siden 1994. Ved anvendelse af en 3% opløsning af gelatine når effektiviteten af isolering af nucleerede celler 88-94%. Udbredt anvendelse af gelatine i skabe navlestrengsblod bank har bekræftet sine fordele i forhold til andre former for sediment. Komparativ analyse af alle de ovennævnte fremgangsmåder til isolering af kerneholdige celler i form af deres sekventiel anvendelse i hver af de test navlestrengsblod prøver viste, at de optimale sedimenter-out mononukleære celler med fænotypen CD34 + / CD45 +, samt med antallet af CFU-GM og CFU-GEMM er 3% gelatineopløsning. Det viste sig at være betydeligt mindre effektive metoder under anvendelse af Ficoll-densitetsgradient, og anvendelsen af methylcellulose og hydroxyethylstivelse hvori hæmatopoietisk celle tab nåede 60%.

Udvidelsen af mængden af stamcelletransplantation af navlestrengsblod er ikke kun forbundet med udviklingen af metoder til deres produktion, men også opbevaring. Der er mange problemer, der er direkte relateret til fremstillingen af ledningsblod til langtidsopbevaring og valget af den optimale cryopreserverings teknologi til sine prøver. Blandt dem er spørgsmålet om hensigtsmæssigheden af at udføre separationsprocedurer, brugen af forskellige cryopreserverende medier og anvendelsen af metoder til fremstilling af optøede celler til transplantation. Transport af indfødte prøver af ledningsblod udføres ofte fra områder fjernt fra hæmatologiske centre. I forbindelse hermed opstår problemet om de tilladte perioder til opbevaring af ledningsblod fra tidspunktet for modtagelsen til begyndelsen af kryopervation, hvilket er af særlig betydning for udviklingen af ledningsblodbanker.

Studiet af den funktionelle aktivitet af hæmatopoietiske navlestrengsblodceller efter langvarig opbevaring (op til 12 år) i flydende nitrogen viste, at ca. 95% af hæmatopoietiske celler i denne periode ikke mister deres høje proliferative kapacitet. Papiret Yurasova S. Et al (1997) viste, at navlestrengsblod opbevares ved stuetemperatur (22 ° C) eller ved 4 ° C i 24 og 48 timer ikke væsentligt reducere levedygtigheden af de hæmatopoietiske celler, som det oprindelige niveau er hensigtsmæssigt 92 og 88%. Men hvis lagringstiden forlænges til tre dage, reduceres antallet af levedygtige nucleerede celler i ledningsblodet signifikant. Samtidig, andre undersøgelser vist, at under opbevaring i 2-3 dage ved en temperatur på 22 ° C eller 4 primært påvirket levedygtighed modne granulocytter, men ikke hæmopoietiske celler.

På levedygtigheden af navlestrengsblod kan hæmatopoietiske stamceller have en negativ indvirkning på systemkomponenter til sin samling. Analyse af virkningen af forskellige antikoagulanter, som virkningsmekanisme skyldes binding af calciumioner (ACD, EDTA, XAPD-1) for hæmatopoietiske progenitorceller i navlestrengsblod opbevaringsforhold for 24 til 72 timer afslørede deres negative indvirkning på levedygtigheden af kerneholdige celler. I denne forbindelse forfatterne anbefaler brugen af PBS (phosphatbufferopløsning) med tilsætning af nativt heparin uden konserveringsmiddel i en koncentration på 20 U / ml, som efter deres mening, gør det muligt at øge varigheden af opbevaring ufraktioneret navlestrengsblod op til 72 timer og gemmer den funktionelle aktivitet af kolonidannende enheder. Men i studiet af bevaring CFU-GM og CFU-G vist, at navlestrengsblod opbevaring tid, før kryopræservering bør ikke overstige ni timer. Naturligvis, i dette tilfælde bør handle det princip, at hvis der er modstridende data skal bruge navlestrengsblod holdbarhed anbefalet minimum og starte en programmerbar fryse- isolerede celler så hurtigt som muligt.

Ved frysning af hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod anvendes en 10% opløsning af DMSO sædvanligvis som en kryobeskyttelsesmiddel. Ud over den udtrykte kryoprotektive virkning har dimethylsulfoxid i denne koncentration imidlertid en direkte cytotoksisk virkning, selv under betingelse af minimal eksponering for navlestrengsblodets bloddannende celler. For at reducere den cytotoksiske virkning af DMSO påføres en nuleksponeringstemperatur, en stigning i hastigheden af alle manipulationer og gentagen vask efter optøning af navlestrengsprøver.

Institut for Hæmatologi og Transfusiologi fra Academy of Medical Sciences of Ukraine har siden 1995 udviklet en videnskabelig retning, hvis mål er at studere ledningsblodet som en alternativ kilde til hæmopoietiske celler. Især er der udviklet nye teknologier til lavtemperaturkryopreservering af hæmopoietiske celler af unfractioneret og fraktioneret ledningsblod. Som kryoprotektant anvendes medicinsk polyvinylpyrolidon med lav molekylvægt. Metoden til kryopreservering af unfractioneret ledningsblod er baseret på den oprindelige teknologi til forberedelse af celler til frysning og teknikken til særlig behandling af cellesuspension umiddelbart før transplantation.

En af de vigtigste faktorer, der påvirker niveauet af funktionel aktivitet af kryopreserverede hæmopoietiske stamceller, er kølehastigheden af cellesuspension, især under krystallisationsfasen. En software-tilgang til løsning af problemet med hastighed og tid for frysning giver gode muligheder for at skabe enkle og yderst effektive metoder til kryopreservering uden at vaske cellesuspensionen fra kryoprotektive midler før transplantation.

Stadierne med øjeblikkelig frysning og optøning er mest farlige for cellernes levedygtighed under deres fremstilling. Ved frysning af de hæmopoietiske celler kan en væsentlig del af dem ødelægges i det øjeblik, hvor det intercellulære medium overgår fra væsken til fastfase-krystallisationen. For at reducere procentdelen af celledød anvendes cryoprotectants, virkningsmekanismerne og cryoprotektiv effektivitet er blevet tilstrækkeligt dækket i den videnskabelige litteratur.

En lovende retning Optimization Teknikker til kryokonservering af knoglemarv og blodceller fra navlestrengen er at kombinere i den samme opløsning for lave koncentrationer af kryobeskyttelsesmidler med flere forskellige virkningsmekanismer for eksempel virker på intracellulære niveau af DMSO og hydroxyethylstivelse eller albumin besidder ekstracellulære omsluttende effekt.

Til kryokonservering af navlestrengsblodceller traditionelt bruges 20% DMSO-opløsning, som er permanent mekanisk omrøring i et isbad blev langsomt hældt i cellesuspensionen at opnå lige (1: 1) volumenforholdet mellem cellesuspensionen og kryobeskyttelsesmidlet. Den endelige koncentration af dimethylsulfoxid er 10%. Cellesuspensionen afkøles derefter på en software-kryostat med en hastighed på HS / min til -40 ° C, hvorefter kølehastigheden øges til 10 ° C / min. Efter at være nået til -100 ° C placeres beholderen med cellesuspensionen i flydende nitrogen (-196 ° C). Med denne metode til kryopreservering når sikkerheden af funktionelt aktive mononukleære celler efter optøning 85% af begyndelsesniveauet.

Modifikationer af kryopreserveringsmetoder tager sigte på at reducere koncentrationen af DMSO ved at tilsætte hydroxyethylstivelse (slutkoncentrationer af dimethylsulfoxid og hydroxyethylstivelse er henholdsvis 5% og 6%). Høj effektiviteten af denne kombination af kryobeskyttelsesmidler observeres, når suspensionen af myeloidceller fryses, med ikke mindre cytoprotektion end med en enkelt 10% opløsning af dimethylsulfoxid. Antallet af levedygtige nucleerede celler nåede 96,7% af basislinjeniveauet, og deres funktionelle aktivitet, estimeret af antallet af CFU-GM, var 81,8%.

Når der anvendes dimethylsulfoxid opløsning ved koncentrationer i området fra 5 til 10% i kombination med 4% hydroxyethylstivelse (slutkoncentration) fandt, at bevarelsen af CD34-positive celler i disse intervaller dimethylsulfoxid set uændret. Samtidig i forhold til dimethylsulfoxidkoncentrationen sænkes fra 5 til 2,5% observeres massedød af navlestrengsblodceller - antallet af levedygtige celleenheder falder fra 85,4 til 12,2%. Andre forfattere konkluderede også, at det var 5 og 10% opløsning af dimethylsulfoxid (i ophavsretten udførelsesform - i kombination med autologt serum) med maksimal effektivitet tilvejebringe cytobeskyttelse under kryokonservering af navlestrengsblod HSC. Desuden sekventielt høj sikkerhed frosset og optøet celle er markeret i tilfælde af kombinationen af 5 eller 10% DMSO 4% hydroxyethylstivelse opløsning, især ved en styret afkølingshastighed på TOS / min. I et andet papir, der anvendes kryobeskyttende opløsning bestående af tre ingredienser allerede - DMSO, oprenset humant albumin og RPMI-medium i et forhold på 1: 4: 5, som blev tilsat til cellesuspensionen op til et tilsvarende volumen-forhold (endelig DMSO-koncentration var 5%). Efter afrimning i et vandbad ved en temperatur på + 4 ° C oversteg sikkerhedsniveauet for CFU-GM 94%.

Nogle forfattere foreslår at anvende ufraktioneret ledningsblod til cryopreservering, da signifikante mængder af hæmatopoietiske celler går tabt under fjernelse af røde blodlegemer. I denne udførelsesform anvendes en 10% opløsning af dimethylsulfoxid til beskyttelse af mononukleære celler fra de skadelige virkninger af kryokrystallisering. Frysning udføres ved en konstant afkølingshastighed på HS / min til -80 ° C, hvorefter suspensionen af navlestrengsblodceller neddyppes i flydende nitrogen. Med denne metode til frysning finder en delvis lysering af erytrocyterne sted, derfor kræver blodprøver ikke fraktionering. Efter optøning vaskes cellesuspensionen fra frit hæmoglobin og dimethylsulfoxid i en opløsning af humant albumin eller i patientens autologe serum og anvendes til transplantation.

Bevarelse af hæmatopoietiske celler efter optøning ufraktioneret navlestrengsblod er faktisk højere end den fraktionerede, men i forbindelse med krioustoychivostyu af de røde blodlegemer kan forårsage alvorlige problemer som følge af post-transfusion Transfusion af ABO-uforeneligt røde blodlegemer. Derudover øges mængden af opbevaret ufraktioneret blod signifikant. Fra et klinisk synspunkt, endnu mere foretrukket kryokonservering tidligere isoleret og oprenset fra andre cellulære fraktioner af navlestrengsblod hæmatopoietiske celler.

Især en fremgangsmåde er kryopræservering af navlestrengsblodceller fraktioneret tillader fjerne erythrocytter som forberedelse til frysning, som bruger en 6% opløsning af hydroxyethylstivelse i præparatet plazmozameshchath opløsning "Stabizol". Efter optøning er den således opnåede cellesuspension klar til klinisk anvendelse uden yderligere manipulation.

På nuværende tidspunkt er der således mange ret effektive måder at kryopreservere på navlestrengsblod. Den væsentligste forskel er, at blodprøver fryses ufraktionerede eller underkastes adskillelse i cellefraktioner under fremstillingsstadiet og høstede nucleerede celler uden en blanding af erythrocytter.

Transplantation af hæmopoietiske stamceller af navlestrengsblod

I slutningen af 80'erne - begyndelsen af 90-erne af det sidste århundrede, blev det konstateret, at navlestrengsblod, der sikrer den vitale aktivitet af fosteret under graviditeten, er rig på bloddannende stamceller. Den relative enkelhed ved at opnå navlestrengsblodceller og fraværet af åbenlyse etiske problemer fremmer anvendelsen af blodblodstamceller i praktisk medicin. Den første vellykkede transplantation af navlestrengsblod til et barn med Fanconis anæmi var udgangspunktet for at udvide omfanget af navlestrengsblod stamcelletransplantation og etableringen af sin bank software system. I det globale system af ledningsblodbanker er den største New York Center for Placental Blood, som står på balancen for National Institutes of Health. Antallet af lagrede ledningsblodprøver i denne bank nærmer sig 20 LLC. Antallet af modtagere (især børn) vokser også, og der er gennemført en vellykket transplantation. Ifølge det amerikanske sundhedsministerium har den tilbagefaldsfrie periode for posttransplantationslivet af modtagere af HSC-blodblod allerede overskredet 10 år.

Dette er ikke overraskende, da talrige undersøgelser i det hæmatopoietiske potentiale af navlestrengsblod har vist, at mængden og kvaliteten af de tidligste stamceller ikke blot er ikke ringere end en voksen human knoglemarv, men også af nogle foranstaltninger overstiger det. En højere proliferativt potentiale af navlestrengsblod stamceller forårsaget udviklingsmæssige celle signalering funktioner, tilstedeværelsen af receptorer på HSC'er til specifikke vækstfaktorer, kapaciteten af ledningen blodlegemer til autokrine produktion af vækstfaktorer, den store størrelse og længden af telomerer.

Således forudbestemmer genomiske og fænotypiske træk ved blodbloddannende navlestrengsblodceller den kvalitative engraftment af en transplantation med et stort potentiale for genoprettelsen af donorhemopoiesis i recipientorganismen.

Fordele ved hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod

Blandt de reelle fordele ved at bruge hæmatopoietisk navlestrengsblod stamceller til transplantation i forhold til andre kilder til hæmatopoietiske celler skal det bemærkes, næsten nul risiko for sundheden af den donor (hvis ikke som sådan en moderkage), og samtidig fjerne behovet for generel anæstesi. Anvendelsen af navlestrengsblod celletransplantation udvider skyldes dels af HLA-kompatible graft-system (uforeneligheder fra et til tre antigener). Teknikken til langtidsopbevaring af hæmatopoietiske navlestrengsblodceller i frossen tilstand, hvilket øger sandsynligheden for at opnå sjældne HLA-type og reducerer søgetiden HLA-matchet allogen transplantation. Samtidig reduceres risikoen for at udvikle nogle latente infektioner transmitteret af transmissionsruten signifikant. Derudover er der en billig form for biologisk livsforsikring i forbindelse med muligheden for at bruge ledningsblodceller til autolog transplantation.

Men fordi små volumener af blod, som kan indsamles fra placenta (et gennemsnit på ikke mere end 100 ml) i forgrunden problemet med at opnå den maksimalt mulige mængde blod fra navlestrengen vene i nøje overensstemmelse med betingelserne for minimal risiko for bakteriel kontaminering af navlestrengsblod afledte prøver.

Primitive hæmatopoietiske celler fra navlestrengsblod er generelt identificeret ved tilstedeværelsen på deres overflade glikofosfoproteina CD34, og på grundlag af deres funktionelle egenskaber ved undersøgelse af klonogene assay eller kolonidannelse in vitro. Komparativ analyse viste, at i navlestrengsblod og knoglemarv maksimalt indhold af CD34-positive mononukleære celler i fraktionen er henholdsvis 1,6 og 5,0%, det maksimale niveau af kolonidannende enheder i en subpopulation af CD34 + -celler - 80 og 25%, alt klondannelseseffektivitet af CD34 + -celler - 88 og 58%, den maksimale kolonidannende celler med høj proliferativt potentiale (HPP-CFC i -populyatsii CD34 +) - 50 og 6,5%. Det skal tilføjes, at den klondannelseseffektivitet CD34 + CD38-celler og evnen til at reagere på cytokinstimulering også højere i hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod.

Kombi fænotypiske antigener Thy-1, CD34 og CD45RA bekræfter den høje proliferative evne navlestrengsblod hæmatopoietiske celler, og ekspression af de tre antigener på overfladen af de navlestrengsblodceller indikerer, at de tilhører den stamcelle. Derudover er det blevet fastslået, at ledningsblod indeholder celler med en CD34 + fænotype, der ikke har lineære differentieringsmarkører. Niveau i navlestrengsblod celle subpopulationer med den fænotypiske profil af CD34 + / Lin er cirka 1% af det samlede antal af CD34-positive celler. Hæmatopoietiske progenitorceller give anledning til navlestrengsblod som en lymfoide cellelinier og et antal lineært pluripotente myeloid celledifferentiering, hvilket også tyder på, at de tilhører stamcellerne.

Som allerede nævnt er de væsentlige forskelle mellem knoglemarv og ledningsblod mængden af hæmatopoietiske celler, der anvendes til transplantation, opnået ved en procedure. Når knoglemarvstransplantation tab af cellemasse i separationsprocessen, kryokonservering, tøning og prøvning er tilladt i området fra 40-50%, ledningen blodlegemer sådant tab er meget betydelig, da ved anvendelse af utilstrækkelige antal HSC transplantation kan være uholdbar. Ifølge G. Kogler et al (1998), for celle transplantation i modtageren legemsvægt på 10 kg potentiel transplantation (total antal af de indsamlede ledning blodprøver - 2098) kan være alle de ledningen blodprøver, legemsvægt 35 kg - 67%, og kun 25% af prøverne vil kunne levere effektiv transplantation hos patienter med en kropsvægt på 50-70 kg. Denne kliniske situation indikerer behovet for at optimere og forbedre effektiviteten af eksisterende metoder til prøveudtagning, reproduktion og opbevaring af navlestrengsblodceller. Derfor er spørgsmålene om standardisering af prøvetagningsmetoder, test, separation og nedfrysning af navlestrengsblod nu bredt diskuteret i litteraturen for oprettelsen af blodbanker, dets anvendelse i klinikken, samt fastsættelse af betingelserne og vilkårene for opbevaring af hæmatopoietiske stamceller i navlestrengsblod.

[11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]

Anvendelsen af hæmatopoietiske stamceller af navlestrengsblod i medicin

Normalt kan op til 10 ⁶ hæmatopoietiske stamceller isoleres fra navlestrengsblod , sjældent mere. I forbindelse hermed forbliver spørgsmålet om tilstrækkeligheden af så mange hæmatopoietiske blodblodceller til at genoprette hæmatopoiesen hos den voksne modtager. Udtalelser om dette spørgsmål blev opdelt. Nogle forskere mener, at denne mængde er tilstrækkelig til transplantationsformål børn, men for lille til at transplantere voksent menneske, for hvilken indgivelsen er optimale (7-10) × 10 ⁶ CD34-positive celler pr 1 kg legemsvægt - gennemsnit på 7 x 10 ⁸ pr. Transplantation. Ud fra disse beregninger følger det, at en navlestrengsprøve indeholder 700 gange mindre hæmatopoietiske stamceller end nødvendigt for en transplantation til en voksen patient. En sådan kvantitativ vurdering foretages imidlertid analogt med antallet af transfuserede celler i knoglemarv og ignorerer fuldstændigt de ontogeniske træk ved hæmatopoiesis.

Især ser bort fra, den højere proliferative kapacitet hæmatopoietiske stamceller fra navlestrengsblod sammenlignet med hæmatopoietiske celler fra knoglemarv. Resultaterne af undersøgelser af det kolonidannende potentiale in vitro tyder på, at en dosis ledningsblod kan tilvejebringe en rekonstituering af hæmatopoiesen hos den voksne modtager. På den anden side bør vi ikke glemme, at antallet af HSC'er falder selv i færd med at embryonale udvikling: indholdet af CD34-positive celler i navlestrengsblod er lineært reduceret 5 gange i en periode på 20 uger (blod for studiet blev opnået i tilfælde af for tidlig svangerskabsafbrydelse) til 40 ugers svangerskab (perioden med fysiologiske fødsler), der ledsages af en parallel, permanent stigning i ekspressionen af lineære cytodifferentiation markører.

På grund af manglen på en standardiseret tilgang til kvantificering af stamceller i navlestrengsblodprøver fortsætter kontroversen over den optimale dosis af stamceller med hæmatopoietisk blodblod. Nogle forskere mener, at som udvælgelseskriterierne af ledningen blodprøver kan anvendes af antallet af celler med kerne og mononukleære celler, genberegne på modtagerens kropsvægt, det vil sige deres dosis. Nogle forfattere mener, at den mindste kvantitative tærskel for CD34 + -celler, selv for at udføre autolog transplantation af HSC, er 2 x 10 ⁶ / kg. Stigningen i dosis af hæmatopoietiske celler til 5 x 10 ⁶ celler / kg (i alt 2,5) indeholder allerede en mere egnet til tidlig posttransplantationsperiode, reducerer forekomsten af infektiøse komplikationer og forkorter perioden med forebyggende antibiotikabehandling.

Ifølge E. Gluckman et al (1998) i hæmatologi for vellykket transplantation af navlestrengsblod celler, det er indførelsen af mindst 3,7 x 10 ⁷ kerneholdige celler per 1 kg legemsvægt af modtageren. Med et fald i dosen af hæmatopoietiske stamceller til 1 x 10 ⁷ og mindre nucleerede celler pr. 1 kg legemsvægt er risikoen for graftfejl og tilbagefald af kræft kraftigt forøget. Det skal erkendes, at det mindste antal stamceller, der kræves til hurtig genopretning af hæmopoiesis efter GSG-allotransplantation, endnu ikke er kendt. Teoretisk kan dette opnås ved anvendelse af en enkelt celle, men i klinisk knoglemarvstransplantation hurtig og stabil indpodning garanteret transfusion mindst (1-3) × 10 ⁸ kerneholdige celler per 1 kg af patientens legemsvægt.

En nylig detaljeret undersøgelse til bestemmelse af den optimale mængde HSC i oncohematology omfattede observationen af patienter af tre grupper isoleret afhængigt af indholdet af CD34-positive celler i transplantationsmaterialet. Patienter fra den første gruppe modtog (3-5) x ¹⁰⁶ celler / kg. Dosis af HSC hos patienter i den anden gruppe var (5-10) x ¹⁰⁶ celler / kg, og patienterne i den tredje gruppe modtog transplantation mere end 10 x ¹⁰⁶ CD34 + celler / kg. De bedste resultater blev observeret i gruppen af modtagere, der modtog en transplantation med antallet af CD34-positive celler svarende til (3-5) x ¹⁰⁶ / kg. Med en stigning i dosen transplanterede celler over 5 × ¹⁰⁶ / kg blev der ikke identificeret statistisk signifikante fordele. Samtidig er et meget stort HSC-indhold i transplantationen (> 10 x 10 ⁶ / kg) forbundet med reinfusion af et betydeligt antal resterende tumorceller, hvilket fører til et tilbagefald af sygdommen. Der var ingen direkte sammenhæng mellem antallet af transplanterede allogene stamceller og udviklingen af "graft versus host" -reaktionen.

Den akkumulerede verdenserfaring ved transplantation af HSC-blodblod bekræfter deres høje genopbygningspotentiale. Engraftmenthastigheden af ledningsblodtransplantationen korrelerer med antallet af indførte nucleerede celler. De bedste resultater observeres med en transplantation på 3 × 10 ⁷ / kg, mens for knoglemarv er denne dosis 2 × 10 ⁸ / kg. Ifølge dataene fra koordinationscentrene blev der i slutningen af 2000 1200 foretaget transplantationer af navlestrengsblodceller i verden, hovedsageligt fra donorrelaterede (83%). Tydeligvis bør ledningsblod betragtes som et alternativ til knoglemarv til transplantation til patienter med hæmoblastose.

Imidlertid neonatal karakter Cordova kilde til hæmatopoietisk væv opmuntrende på grund af tilstedeværelsen af funktionelle forhold ved GCW. Dog kan kun klinisk erfaring give et svar på spørgsmålet om tilstrækkeligheden af en prøve af navlestrengsblod til voksne hæmatopoietisk rekonstruktion af modtageren med aplasi af bloddannelsen. Transplantation af navlestrengsblod celler bruges i behandling af mange sygdomme i tumor- og ikke-tumor natur: leukæmier og myelodysplastiske syndromer, non-Hodgkins lymfom og neuroblastom, aplastisk anæmi, medfødt Fanconi anæmi og Diamond Black fan, mangel på leukocytadhæsion, Barr syndrom, Gunther sygdom Harlera syndrom, thalassæmi .

Nøje opmærksomhed og separat forskning fortjener de immunologiske aspekter ved transplantation af bloddannende celler i navlestrengsblod. Det vises, at i tilfælde af transplantation af navlestrengsblod stamceller fra donorer med ufuldstændige HLA-matchede transplantationsresultaterne er ganske tilfredsstillende, at ifølge forfatterne, hvilket indikerer en lavere immunreaktivitet navlestrengsblod end knoglemarven.

En detaljeret undersøgelse af den cellulære sammensætning af navlestrengsblod viste elementer af både fænotypisk spektrum af effektorceller i immunsystemet og deres funktionelle aktivitet, gør det muligt at overveje navlestrengsblod som en kilde til HSC'er med forholdsvis lav risiko for reaktion "transplantat versus vært". Blandt tegnene på funktionelt umodne immunokompetente navlestrengsblodceller skal man bemærke en ubalance i cytokinproduktionen og et fald i følsomheden over for cytokinreguleringen af immunresponset. Den resulterende inhibering af cytotoksisk lymfocytaktivitet betragtes som en faktor, der bidrager til dannelsen af immunologisk tolerance over for det transplanterede hæmopoietiske væv. I navlestrengsblodlymfocytpopulationen, i modsætning til perifert blod og knoglemarv hos voksne donorer, dominerer inaktive, umodne lymfocytter og suppressorceller. Dette indikerer en nedsat tilgængelighed af blodblod T-lymfocytter til immunresponset. Et vigtigt træk ved monocytpopulationen af navlestrengsblodceller er det lave indhold af funktionelt komplette og aktive antigenpræsenterende celler.

På den ene side en lav grad af modenhed af effektorceller i immunsystemet i navlestrengsblod aflæsninger strækker sig til dens anvendelse i klinikken, da disse funktioner tillader reduktion i intensiteten af immun konflikt mellem donor- og recipientceller. Men på den anden side ved vi, at der findes en sammenhæng mellem graden af reaktion "graft versus host sygdom" og transplantation antitumoreffekt, dvs. Effekten af udviklingen af "graft-versus-leukæmi". I forbindelse hermed blev der foretaget en undersøgelse af antitumoral cytotoksicitet af navlestrengsblodceller. Resultaterne viser, at på trods af den virkelig svækket immunforsvar af navlestrengsblod celler til antigen stimulering, aktiveres i første omgang er de naturlige dræberceller og killeropodobnymi celler, der er aktivt involveret i mekanismerne for gennemførelse af anti-tumor-cytotoksicitet. Øvrigt i navlestrengsblod lymfocytsubpopulationer blev fundet med fænotypen CD16 + CD56 + og CD16 "TCRA / p +. Det antages, at disse celler i en aktiveret form gennemføre reaktion" graft-versus-leukæmi".

På Institut for Onkologi, Academy of Medical Sciences i Ukraine kryopræserverede hæmatopoietiske celler fra navlestrengsblod blev givet til kræftpatienter med vedvarende hypoplasi af hematopoiese på grund af kemoterapi og strålebehandling. Hos disse patienter, transplantation af hæmatopoietiske stamceller fra navlestrengsblod effektivt restaureret blod undertrykkelse, som vist ved vedvarende forhøjelse af modne dannede elementer i det perifere blod, samt en stigning i indikatorer kendetegner tilstand af cellulær og humoral immunitet. Stabilitet af repopuleringseffekten efter transplantation af bloddannende celler af navlestrengsblod tillader fortsat stråling og kemoterapi uden at afbryde behandlingsforløbet. Der er tegn på større effektivitet allograft stamcelle navlestrengsblod kræftpatienter: den årlige risiko for fornyet en tumor i deres brug var 25% mod 40% hos patienter med en transplanteret allogen knoglemarvstransplantation gen.

Bør overvejes Virkningsmekanismen af kryopræserverede navlestrengsblod stamceller som følge af en humoral stimulering af hæmatopoiese modtagere forårsaget af den unikke evne af neonatale celler til autokrine produktion af hæmatopoietiske vækstfaktorer, såvel som en konsekvens af den midlertidige inkorporering af donorceller (som en bekræftelse - en signifikant forøgelse af indholdet af perifert blod føtalt hæmoglobin modtager 7-15 dag efter transfusion i sammenligning med basisdata). Fravær i modtagere af navlestrengsblod efter transfusion reaktioner - resultat af dens relative tolerance af immunceller, samt den tillid kriteriet nytten af kryopræserverede biologisk materiale.

Progenitorceller T lymfocytter killer navlestrengsblod i stand til aktivering under indflydelse af eksogent cytokin stimulering, der bruges til at udvikle nye ex vivo og in vivo fremgangsmåder til fremkaldelse af anti-tumor cytotoksisk lymfoide celler til efterfølgende transplantation immunterapi. Hertil kommer, at "umodenhed" af genomet af navlestrengen blod immunceller muliggør deres anvendelse til forøgelse antitumoraktivitet ved molekylær modellering.

I dag har ledningsblod fundet bred anvendelse primært i pædiatrisk hæmatologi. I børn med akut leukæmi allotransplantation af hæmatopoietiske stamceller fra navlestrengsblod sammenlignet med knoglemarv allografter, reducerer forekomsten af reaktion "transplantat versus vært". Men skal det bemærkes, over en lang periode af neutropeni og trombocytopeni, og desværre, et højere niveau af dødeligheden 100-dages post-transplantation. En længere periode med bedring i de perifere blod granulocytter og blodplader kan skyldes utilstrækkelig differentiering af individuelle subpopulationer af CD34-positive celler fra navlestrengsblod, som det fremgår af det lave niveau af absorption af radioaktivt rhodamin og lav ekspression af CD38 antigener på deres overflade.

Samtidig, transplantation af hæmatopoietiske stamceller fra navlestrengsblod af voksne patienter, der udføres på grund af manglende både en kompatibel ubeslægtet knoglemarvsdonor, samt muligheder for at mobilisere autologe HSC viste høj årlig tilbagefald overlevelse i patienter under 30 år (73%) . Ekspansion modtager aldersgruppe (18-46 år) faldt overlevelsen til 53%.

Kvantitativ analyse af celler med fænotypen CD34 + knoglemarv og navlestrengsblod viste højere (3,5 gange) deres indhold i knoglemarven, men navlestrengsblod viste en signifikant overvægt af celler med fænotypisk profil af CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markører CD34 + HLA-DR proliferere mere aktive end celler med immunfænotype CD34 + HLA-DR +, som bekræftet i eksperimentelle undersøgelser af væksten af langtidsdyrkning af hæmatopoietiske celler in vitro. Primitive-stamceller med fænotypen CD34 + CD38 indeholdt i navlestrengsblod og knoglemarv, men navlestrengsblod celler med markøren sæt CD34 + CD38 har højere klonale aktivitet end hæmatopoietiske celler af samme fænotype, isoleret fra voksne donorknoglemarv. Desuden vil navlestrengsblod celler med CD34 + CD38 immunfænotype proliferere som respons på stimulering med cytokiner (IL-3, IL-6, G-CSF) og reproducere 7 gange flere kolonier i de langsigtede kulturer end knoglemarvsceller.

Banker af ledningsblod stamceller

For korrekt udvikling af det nye felt af praktisk medicin - transplantation af navlestrengsblod stamceller, samt at udføre transplantationer af bloddannende knoglemarv stamceller, skal du have et omfattende netværk af blodbanker, som allerede er etableret i USA og Europa. De intra-statlige netværk af trådblodbanker er forenet af Association of Netcord Banks. Muligheden for at etablere en international sammenslutning af navlestrengsblod banker er bestemt af det faktum, at for at udføre ubeslægtede transplantationer brug for et stort antal prøver af navlestrengsblod skrevet, gør det muligt at vælge den HLA-identisk donor. Kun oprettelsen af et system af banker med opbevaring af blodprøver af forskellige HLA-typer i dem kan virkelig løse problemet med at finde den nødvendige donor. Organiseringen af et sådant system af trådblodbanker kræver den foreløbige udvikling af etiske og juridiske normer, som i øjeblikket drøftes på internationalt plan.

For at oprette ledningsblodbanker i Ukraine er det nødvendigt at udarbejde en række bestemmelser og dokumenter.

Først og fremmest er det spørgsmål om standardisering af metoder til prøveudtagning, fraktionering og frysning af navlestrengsblod. Det er nødvendigt at regulere reglerne for prøveudtagningssnorblod i barselssygehuse i overensstemmelse med kravene i medicinsk etik for at bestemme den minimale mængde ledningsblod, der sikrer en vellykket transplantation. Det bør sammenlignes og standardisering af forskellige kriterier for evaluering af kvaliteten og antallet af hæmatopoietiske progenitorceller såvel som HLA-typningsmetoder og fremgangsmåder til diagnose af genetiske og infektiøse sygdomme, som kan overføres af infusion af navlestrengsblod celler sat generelle udvælgelseskriterier raske donorer. Det er også værd at diskutere oprettelsen af separate lagerfaciliteter for serum, celler og DNA afledt af ledningsblod.

Det er absolut nødvendigt at organisere et computernetværk af data om ledningsblod til gennemførelse af forholdet til registret over knoglemarv donorer. For at videreudvikle celletransplantologi bør der udvikles særlige protokoller til sammenligning af resultaterne af ledningsblod og knoglemarvstransplantation fra HLA-identiske slægtninge og uafhængige donorer. Ved behandlingen af etiske og juridiske problemer i den kliniske anvendelse af navlestrengsblod celler kan hjælpe standardisere dokumentation, herunder informeret samtykke fra forældrene, samt meddelelse om mor eller pårørende til barnet er identificeret ved genetisk og / eller infektionssygdomme.

Den afgørende forudsætning for udviklingen af celletransplantation i Ukraine vil være vedtagelsen af det nationale program for donation af stamceller og udvikling af det internationale samarbejde med andre lande gennem World Association of donor knoglemarv (WMDA), National amerikanske donor knoglemarv program (NMDP) og andre registre.

Generalisere stadig korte historie hæmatopoietisk stamcelletransplantation af navlestrengsblod, kan vi konstatere, at den første antagelse om muligheden for klinisk anvendelse af navlestrengsblod, lavet i begyndelsen af 70'erne, blev bekræftet i de 80 år resultaterne af eksperimentelle undersøgelser på dyr, og i 1988 år er blevet udført verdens første transplantation af hæmatopoietiske celler af human navlestrengsblod, og derefter begyndte at udvikle et globalt netværk af ledningen blodbanker. Efter 10 år er antallet af patienter med transplanterede hæmatopoietiske celler, navlestrengsblod tættere på 800. Blandt dem var patienter med forskellige tumorsygdomme (leukæmi, lymfom, massive tumorer) og ikke-tumor (medfødt immundefekt, anæmi, sygdomme forbundet med metaboliske forstyrrelser) natur.

I ledningsblod er indholdet af tidlige og engagerede celleforløbere højere end i den perifere blod hos en voksen. Med antallet af granulocyt-makrofag-kolonidannende enheder og deres proliferative potentiale overskrider navlestrengsblod signifikant det voksne perifert blod selv efter indførelsen af vækstfaktorer. I langvarige cellekulturer in vitro var der en større proliferativ aktivitet og levedygtighed af navlestrengsblodceller end knoglemarvsceller. De kritiske øjeblikke i transplantation af navlestrengsblod stamceller er hæmatopoietiske potentielle antal og celler med kerne, tilstedeværelsen af cytomegalovirus infektion, HLA-kompatibel donor og modtager, kropsvægt og patientens alder.

Ikke desto mindre bør stamceltransplantation af navlestrengsblod betragtes som et alternativ til knoglemarvstransplantation for at behandle alvorlige blodsygdomme, især hos børn. Kliniske problemer med transplantation af navlestrengsblod celler gradvist løst - der er allerede ganske effektive stikprøver, separation og kryokonservering af navlestrengsblodceller, forudsat at betingelserne for dannelsen af ledningen blodbanker er de testmetoder forbedret kerneholdige celler. Optimal adskillelse under de store præform navlestrengsblod hæmatopoietiske stamceller i etableringen af banker bør betragtes som en 3% opløsning af gelatine og 6% hydroxyethylstivelse opløsning.

Perehrestenko P. Et al (2001) med rette påpege, at transplantation af navlestrengsblod stamceller bør indtage sin retmæssige plads i de komplekse terapeutiske foranstaltninger til at overvinde depression af hæmatopoiese af forskellig oprindelse, som GSK navlestrengsblod adskiller sig på en række væsentlige fordele, blandt hvilke vigtigt er den relative lethed af høst, er der ingen risiko for donoren, lav forurening af neonatale celler med virus og relativt lave omkostninger af transplantatet. Nogle forfattere foreslår, at transplantation af navlestrengsblod celler mindre hyppigt end knoglemarvsceller er ledsaget af komplikationer forbundet med omsætningen af "graft versus host", hvilket skyldes, i deres opfattelse en svag ekspression i ledningen blodceller af HLA-DR-antigener og deres umodenhed. Alligevel hovedpopulationen af kerneholdige celler fra navlestrengsblod er T-lymfocytter (SDZ-positive celler), hvis indhold er ca. 50%, hvilket er 20% mindre end i det perifere blod hos en voksen, men de fænotypiske forskelle i subpopulationer af T-celler fra disse kilder er ubetydelige.

Blandt de faktorer, der direkte påvirker overlevelsen af stamcelletransplantation af navlestrengsblod, bør vi bemærke patienternes alder (de bedste resultater set i recipienter alderen op til 5 år), tidlig diagnose af sygdommen og en form for leukæmi (effektivitet er betydeligt højere i akut leukæmi). Af stor betydning er dosis af nukleerede navlestrengsblodceller samt deres HLA-kompatibilitet med modtageren. Det er ikke tilfældigt analyse af den kliniske effekt af navlestrengsblod transplantation GSK i Onkologi og Hæmatologi viser de bedste resultater af behandling med relaterede transplantationer: etårig sygdomsfri overlevelse i dette tilfælde når op på 63%, mens den uafhængige transplantation - kun 29%.

Tilstedeværelsen af et stort antal af stamceller i navlestrengsblod og høj repopulyatsionnaya evne neonatale hæmatopoietiske stamceller gør dem egnede til allogen transplantation i patienter med hæmatologiske maligniteter. Bemærk dog, at den sammenfatning af hæmatopoiese efter transplantation af hæmatopoietiske stamceller i navlestrengsblod "strækkes i tiden": at genoprette indhold i perifere blodneutrofiler normalt opstår i slutningen af det 6. Uge, og trombocytopeni fænomen forsvinder, sædvanligvis efter 6 måneder. Hertil kommer, at de umodne bloddannende celler fra navlestrengsblod ikke udelukke immunologisk konflikt: alvorligt forløb af akut og kronisk reaktion "transplantat versus vært" observeret i henholdsvis 23 og 25% af modtagerne. Tilbagefald af akut leukæmi ved udgangen af det første år efter transplantation af navlestrengsblodceller er noteret i 26% af tilfældene.

[18], [19], [20], [21]