Analyse af restriktionsfragmentlængdepolymorfisme

Den udbredte anvendelse af forskellige restriktionsendonukleaser til analyse af kromosomalt DNA har afsløret den enorme variation i det menneskelige genom. Selv små ændringer i de kodende og regulatoriske regioner af strukturelle gener kan føre til ophør af syntesen af et bestemt protein eller til tab af dets funktion i den menneskelige krop, hvilket normalt påvirker patientens fænotype. Imidlertid består cirka 90% af det menneskelige genom af ikke-kodende sekvenser, som er mere variable og indeholder mange såkaldte neutrale mutationer eller polymorfier og ikke har nogen fænotypisk ekspression. Sådanne polymorfe regioner (loci) anvendes i diagnosticeringen af arvelige sygdomme som genetiske markører. Polymorfe loci er til stede i alle kromosomer og er knyttet til en specifik region af genet. Ved at bestemme lokaliseringen af et polymorf locus er det muligt at fastslå, hvilket gen der er forbundet med den mutation, der forårsagede sygdommen hos patienten.

For at isolere polymorfe DNA-regioner anvendes bakterielle enzymer - restriktaser, hvis produkt er restriktionssteder. Spontane mutationer, der forekommer i polymorfe steder, gør dem resistente eller omvendt følsomme over for virkningen af en specifik restriktase.

Mutationsvariabilitet i restriktionssteder kan detekteres ved at ændre længden af restriktionsfragmenter af DNA ved at separere dem ved hjælp af elektroforese og efterfølgende hybridisering med specifikke DNA-prober. I fravær af restriktion i et polymorft sted vil ét stort fragment blive detekteret på elektroforegrammer, og i dets tilstedeværelse vil et mindre fragment være til stede. Tilstedeværelsen eller fraværet af et restriktionssted i identiske loci af homologe kromosomer muliggør en forholdsvis pålidelig mærkning af det mutante og normale gen og sporing af dets transmission til afkom. Når man studerer DNA fra patienter i begge kromosomer, hvor et restriktionssted er til stede i en polymorf region, vil korte DNA-fragmenter således blive detekteret på elektroforegrammet. Hos patienter, der er homozygote for en mutation, der ændrer det polymorfe restriktionssted, vil længere fragmenter blive detekteret, og hos heterozygote patienter korte og lange fragmenter.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]